在刑事化验工作中，经常会遇到安眠药筛选检验，因为各种安眠药经常被犯罪分子用于麻醉抢劫、麻醉凶杀等。对于常见安眠药的提取检验，普遍采用的液-液提取法需根据药物的性质，在酸、碱条件下分别萃取净化，操作费时而且耗费大量有机溶剂。相对液-液萃取法而言，固相萃取法操作简便，所用溶剂少，回收率高，净化效果好，是很有前景的检材前处理方法。本方法采用睿科 Fotector系列全自动固相萃取仪和津杨GDX-403树脂柱净化尿液中的巴比妥和安定两种常见安眠药的固相萃取方法。
该方法操作简便，回收率高，完全可以用于实际办案中。
仪器、耗材
睿科Fotector Plus / Fotector-02HT全自动固相萃取仪
津杨GDX-403树脂（400 mg/3mL）
Agilent 7890A/5975C气相色谱/质谱联用仪
色谱柱Agient HP-5M（50m×250μm×0.25μm）
离心机漩涡混匀器
甲醇、乙醇、无水乙醚均为分析纯试剂
实验用水直接使用自来水
样品提取与前处理
样品前处理
取尿样2mL于离心管中，加入pH=6缓冲液5 mL，超声5 min，1000 r/min离心15 min，将上清液置于样品瓶中，GDX-403柱装在全自动固相萃取仪上，按图1进行固相萃取。洗脱液浓缩至干用乙醇定容至1mL，供GC/MS检测。
固相萃取净化条件
表-1. 固相萃取净化条件
| 全自动固相萃取仪 | 睿科Fotector Plus 60位or Fotector-02HT |
| 固相萃取柱 | 津杨GDX-403树脂（400 mg/3mL） |
| 淋洗 | pH 6.0 磷酸盐缓冲液，水 |
| 洗脱 | 无水乙醚 |
样品净化步骤
以0.5 mL/min的速度上样7 mL待测液，2 mL磷酸缓冲溶液润洗样品瓶，吹干小柱10 min，最后以3 mL的无水乙醚，以0.5 mL/min的速度洗脱样品，氮吹浓缩至0.5 mL以下，定容至1 mL。详细步骤见图-1。
图-1. Fotector Plus / Fotector-02HT 尿液中安眠药固相萃取净化方法
检测条件
气相色谱质谱联用条件
GC-MS检测条件：进样口温度290 ℃，不分流进样，进样量1.0mL；载气为高纯He气，恒流模式，流速为1.0 mL/min；电子轰击电离源（EI），离子源温度230 ℃，接口（传输线）温度280 ℃，质量分析器温度150 ℃，全扫描模式（Scan），电子倍增器检测电压1576 V。
GC程序升温程序：初始温度50 ℃，保持1 min；以20℃/min速度升温至150℃，保持2 min；以10℃/min速度升温至300℃，保持5 min。
定量离子及保留时间
表-2. 2种安眠药的保留时间及离子碎片
| 项目 | CAS | 保留时间 | 离子碎片 | |
| 巴比妥 | Barbital | 57-44-3 | 10.218 | 156，141 |
| 安定 | Diazapam | 439-14-5 | 20.324 | 256，283 |
标准样品色谱图
图-2. 2种安眠药的色谱图（2 μg/L）
方法可行性验证
基质影响
图-3中标准品和空白基质加标的全扫描叠加图可以看出，尿样基质非常复杂，采用全扫描干扰严重。采用SIM模式，样品基质对测定干扰较小（图-4），巴比妥156的检测几乎没有基质效应，但是安定化合物256处有一定的基质抑制作用，导致样品响应值有所下降。故采用基质工作标准曲线进行定量，以免基质效应对检测产生影响。
图-3. 尿样基质加标和标准品全扫描叠加图（黑色，标准品；蓝色，样品加标）
图-4. 尿样基质加标和巴比妥选择离子（156，左）安定选择离子（256，右）扫描叠加图扫描叠加图（黑色标品，蓝色为样品加标）
样品加标回收率测试
在2 μg/mL的加标水平下，样品经过前处理提取，萃取后，用Fotector plus/Fotector-02HT全自动固相萃取仪净化，巴比妥的回收率在91.2~96.7%之间，RSD=2.4%（n=3），安定的回收率在74.3~85.2%之间，RSD=5.7%（n=3），完全满足公安系统检测对回收率的要求，回收率如表-3所示：
表-3. 加标回收率（%）
| 化合物 | 定量离子 | R1 | R2 | R3 | Avg | RSD |
| 巴比妥 | 156 | 94.6 | 91.2 | 96.7 | 94.2 | 2.4 |
| 安定 | 256 | 78.2 | 74.3 | 85.2 | 79.2 | 5.7 |
结果与讨论
采用GDX403树脂萃取柱，通过睿科Fotector系列全自动固相萃取仪净化和气质联用仪检测，对尿样中巴比妥和安定的检测，可取得较好的结果，完全适用于公安系统实际办案中。
