[猪病检测]猪副嗜血杆菌抗体检测

biovet猪副嗜血杆菌抗体检测试剂

检测原理：

猪的血清样品和对照经过稀释后加入到包被了HPS抗原的微孔板中孵育，同时也加入到包被了cell lysate 的微孔板中孵育。阳性样品中对HPS特异反应的抗体会和微孔板中的抗原结合。多次洗板是为了清除未结合的物质，加入酶标记物标记抗体。孵育后，多次洗板清除未结合的酶，最后加入底物发色剂显色。在这步孵育过程中，如果有酶存在，将会有绿色产生，读出其吸光度。通过颜色的鉴定判断样品的结果。阴性对照反应很不明显（很淡的绿色），而阳性对照反应很明显（深绿色）。

材料：

必须的材料但试剂盒内不提供的：

1．纯净水

2．可调单多道移液枪

3．吸头

4．ELISA洗板机

5．试管（用于样品稀释）

6．酶标仪（带405nm波长的）

7．可以用于稀释其他缓冲液的容器

试剂盒提供的

1．包被HPS抗原的96孔微孔板，非包被的微孔板（蓝色）各一块

2．可以直接用的阳性对照                                               2mL

3．可以直接用的阴性对照                                               2mL

4．酶标记物                                                           50uL

5．10倍浓缩洗液                                                   2×100mL

6．可以直接用的底物发色剂                                             30mL

7．可以直接用的终止液                                                 30mL

注：终止液保存在4℃时，可能有晶体产生，这个时候使用不会产生任何效果，请把他放回室温待晶体溶解后使用。

操作步骤：

A． 洗液的准备

用蒸馏水稀释十倍，例如50mL浓缩洗液加450mL蒸馏水，稀释后在4℃可以保存1周。

B． 样品准备

强烈建议样品和对照物做平行

用1倍浓度的洗液（参见步骤A）按1：50稀释猪血清（例如：6uL样品放入294uL1X洗液中）。保证每个吸头都是新的并且样品都充分混匀。

C． 用1倍浓度的洗液（参见步骤A）（详见英文说明书）

D．检测步骤：

回温

1． 建立板的图表

2． A1 A2加入阳性对照

3． B1 B2加入阴性对照

4． C1/C2,D1/D2。。。加入样品

5． 23℃孵育30分钟

6． 300uL1倍浓度的洗液反复洗4次。

7． 加入100uL酶标记物到每个孔中

8． 23℃孵育30分钟

9． 洗板

10．              每孔中加入100uL底物

11．              避光在23℃条件下孵育20分钟

12．              加入100uL终止液

13．              405nm波长下测吸光度（详见说明书）

14．              计算

结果：

每个样品S    包被孔有抗原的为1 没抗原的为2  P为阳性对照

     (OD s1 —OD s2)

R=_________________________

(OD p1 —OD p2)

检测有效性

阴性对照R必须小于0.25

阳性对照OD必须大于0.6

结果判断

R小于0.6的为阴性

R大于等于0.9的为阳性