莱克多巴胺检测试剂盒

 
产品用途：可快速定性、定量检测猪尿、羊尿、牛尿、猪肉、猪肝、羊肉、羊肝、牛肉等样本中的莱克多巴胺。

产品特点：                 1、灵敏度高，试剂盒灵敏度为0.03ppb；                 2、室温条件即可完成检测实验；                 3、30min内即可完成检测试验。

产品说明：

一、概要

         莱克多巴胺属于β-兴奋剂类药物，俗称瘦肉精，可提高胴体瘦肉率，曾被广泛添加于饲料中。人食用了含莱克多巴胺残留的动物性食品，会出现肌肉震颤、心悸、过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗等症状，世界各国已明令禁止其使用。莱克多巴胺酶联免疫试剂盒具有方便、快速、灵敏等特点，适用于大批量样品筛查。
二、试验原理

         待测样品中的莱克多巴胺残留与微孔预包被的抗原共同竞争酶结合特异性抗体，通过酶催化显色，如果莱克多巴胺含量少，显色深，反之显色浅。
三、适用范围

         可定性、定量检测猪尿、羊尿、牛尿、猪肉、猪肝、羊肉、羊肝、牛肉等样本中的莱克多巴胺。
四、使用单位需自备的设备及试剂
设备：┅┅酶标仪450nm/630nm┅┅离心机（4000g)┅┅微量移液器：┅┅计时器试剂：┅┅三氯乙酸┅┅氢氧化钠
五、提供的材料与试剂

组份名称	规格	备注
酶标板	96T	其它各规格装量按比例增加或减少，具体装量以实物为准。
标准品×6瓶*	1mL
RAC酶标Ⅱ抗浓缩液（11×)	0.8mL
RAC抗体工作液	8mL
RAC缓冲液A	4mL
RAC缓冲液B	4mL
RAC缓冲液C	4mL
底物A液	7mL
底物B液	7mL
终止液	7mL
浓缩洗涤液（20×）	25mL

*注：标准品浓度分别为0ppb、0.03ppb、0.09ppb、0.27ppb、0.81ppb、2.43ppb。
六、溶液的配制

配液1: 洗涤工作液

用去离子水将浓缩洗涤液（20×）按1 : 19体积比进行稀释，即1份浓缩洗涤液（25×）加19份去离子水。用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。

配液2: 组织提取液      

       称取1 g三氯乙酸，加入100 mL去离子水充分溶解。

配液3: 0.5 M 氢氧化钠溶液

       称取2 g氢氧化钠，加入100 mL去离子水充分溶解。

注：组织提取液、0.5 M 氢氧化钠溶液室温条件下可保存2周，过期需重新配制！
七、样本前处理

（一）猪尿、羊尿（稀释系数：2）

┅┅检测前需在样品孔内先加入20 μL莱克多巴胺缓冲液A；

┅┅取20 μL尿样进行检测。

（二）牛尿（稀释系数：2）┅┅检测前需在样品孔内先加入20 μL莱克多巴胺缓冲液B；┅┅取20 μL尿样进行检测。注：若尿样浑浊，可4000 g离心5 min后取上清液进行检测。（三）组织（猪肉、猪肝、羊肉、羊肝、牛肉）（稀释系数：8）注：此方法处理的样本可同时检测克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇！┅┅准确称取2±0.01g新鲜组织样本于50mL离心管中；┅┅加入3 mL洗涤工作液（配液1），再加入3 mL组织提取液（配液2），高速涡动1 min；

┅┅4000 g以上离心5 min；

┅┅取1 mL中间清液于新的离心管中；注：避免取到上、下层固体，否则影响检测结果！┅┅加入40 μL 0.5 M 氢氧化钠溶液（配液3），涡动10 s混匀；

┅┅4000 g以上离心5 min；

┅┅取20 μL进行检测。
八、检测步骤

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（25±2℃）平衡2h左右，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。2、将板条插入酶标板架上，并记录下各标准品和样品的位置，建议均做双孔平行，未使用的板条用自封袋密封后，立即保存于2-8℃环境中；3、加标准品：将40 μL各标准品工作液分别加入对应的标准品孔中；

4、检测猪尿、羊尿：将20 μL莱克多巴胺缓冲液A加入样品孔，再加入20 μL尿样；

5、检测牛尿：将20 μL莱克多巴胺缓冲液B加入样品孔，再加入20 μL尿样；6、检测组织：将20 μL莱克多巴胺缓冲液C加入样品孔，再加入20 μL样品加入样品孔中；7、莱克多巴胺酶标Ⅱ抗浓缩液与抗体工作液的混合：按1:10体积比混合（取1份莱克多巴胺酶标Ⅱ抗浓缩液+10份莱克多巴胺抗体工作液），轻柔混匀。室温（25±2℃）平衡20-30 min；注：操作中应严格控制该步骤时间，即混合液平衡20-30min后立即使用！8、每孔加入60 μL酶标Ⅱ抗--抗体混合液（见9.6）；9、盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10 s，充分混匀，室温下（25±2℃）避光反应30 min；10、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液260μL/孔，充分洗涤4次，每次浸泡15-30s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。11、显色：立即在每孔中加入100 μL底物A、B混合液；盖好盖板膜，轻轻振荡酶标板10 s，充分混匀，室温下（25±2℃）避光反应15-20 min；注：底物A液、底物B液按体积1:1混合，必须充分混匀，混合液在5 min内使用，避免使用金属盛装、搅拌试剂！

12、终止：揭开盖板膜，每孔中加入50 μL终止液，轻轻振荡酶标板10 s，充分混匀；

13、读数：终止后5 min内用酶标仪在双波长450 nm、630 nm下读取酶标板吸光度值。

九、结果判定

1. 各标准品（或样品）的平均吸光度值，除以零标（浓度为0 ppb的标准品）吸光度值，乘以100，可以得到各标准品对应的吸光度的百分比。

2. 将各标准品所得值输入半对数系统中，与对应各标准品浓度可以拟合标准曲线，请参见“标准曲线参考图”。

3. 将样品吸光度的百分比代入标准曲线，可得出样品对应的浓度，再乘以相应样品的稀释倍数，方得样品实际含量。

十、试剂盒参数试剂盒灵敏度：0.03 ppb精密度：试剂盒吸光度板内误差小于5%，板间误差小于10%。回收率：   猪尿、羊尿………………90%±20%   牛尿………………………100%±20%   组织………………………90%±30%样品最低检测限： 组织、猪尿、牛尿、羊尿…………约0.5ppb 特异性：莱克多巴胺酶联免疫试剂盒的特异性是通过与相应的物质进行交叉反应试验来确定的，结果如下：莱克多巴胺……………..…100%

多巴判丁胺、马布特罗、利托君、克伦丙罗、西马特罗、塞布特罗、克伦特罗、沙丁胺醇、溴布特罗、卡布特罗............................................<0.1 %

十一、注意事项

1、试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3、每加一种试剂前需将其摇匀。4、反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。6、储存条件   保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7、试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.8（A450nm<0.8）时，表示试剂可能变质。8、在加入显色液后，一般显色时间为15min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到20min（或更长）。反之，则减短反应时间。9、浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。10、该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。11、本试剂盒应用于筛查实际样品，检测若为阳性样品，应该用另一种方法如HPLC或LC/MS加以确证。
十二、贮藏条件及保存期

    贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。保存期：该产品有效期为12个月。