玉米赤霉烯酮检测试剂盒

产品用途：用于检测玉米及玉米制品，饲料等样本中存在的玉米赤霉烯酮。产品特点：1、室温条件即可完成检测实验；2、检测结果稳定，变异系数小；产品说明：一、概要玉米赤霉烯酮(Zen)又称F-2毒素，它首先从有赤霉病的玉米中分离得到。玉米赤霉烯酮其产毒菌主要是镰刀菌属(Fusarium)的菌侏，如禾谷镰刀菌和三线镰刀菌。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麦、大米、大麦、小米和燕麦等谷物。其中玉米的阳性检出率为45%，最高含毒量可达到2909mg/kg；小麦的检出率为20%，含毒量为0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐热性较强，110℃下处理1h才被完全破坏。玉米赤霉烯酮具有雌激素样作用，能造成动物急慢性中毒，引起动物繁殖机能异常甚至死亡，可给畜牧场造成巨大经济损失。玉米赤霉烯酮是玉米赤霉菌的代谢产物。1980年李季伦教授发现植物体内也存在玉米赤霉烯酮。二、试验原理本试剂盒采用直接竞争ELISA方法检测样本中的玉米赤霉烯酮，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的玉米赤霉烯酮和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗玉米赤霉烯酮抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的玉米赤霉烯酮含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出玉米赤霉烯酮含量。三、适用范围用于检测玉米及玉米制品，饲料等样本中存在的玉米赤霉烯酮。四、使用单位需自备的设备及试剂设备：┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm┅┅样品破碎器或料理机┅┅振荡器┅┅恒温培养箱┅┅涡旋仪┅┅离心机┅┅天平：感量0.01g┅┅微量移液器：单道 20μL～200μL、200μL～1000μL、多道 250μL┅┅聚苯乙烯离心管：1.5mL、10mL、50mL试剂：---- 甲醇（分析纯）---- 氯化钠----去离子水五、提供的材料与试剂 

组份名称	96T装量	备注
酶标板	96T	其它各规格装量按比例增加或减少，具体装量以实物为准。
标准品×6瓶*	1mL
玉米赤霉烯酮酶结合物	13mL
浓缩洗涤液（10×）	50mL
底物液A	6mL
底物液B	6mL
反应终止液	6 mL

*注：标准品为0μg/kg, 2μg/kg, 4μg/kg,, 8μg/kg ,20μg/kg, 100μg/kg。六、溶液的配制1．配液1: 将待测样品及试剂盒中所有成分，在25℃环境下，至少回温40分钟。2．工作洗涤液配制。（用于洗板）利用蒸馏水将10倍浓缩洗涤液以1:9比例稀释（即1mL 10倍浓缩洗涤液+9mL蒸馏水），即可作为清洗微孔使用的工作洗涤液。（10倍浓缩洗涤液请确实回温后使用，并请检查溶液底部之结晶是否完全溶解。）还原型孔雀石绿抗体工作液配制。3.  10%甲醇溶液配制准确量取10ml甲醇，加入90ml去离子，即为10%甲醇溶液。配制好的甲醇溶液请尽快使用，若用不完请保存于2~8 ℃，请勿超过一星期。4.  用剩余的测试条孔则放回铝箔袋中干燥保存，储存于2~8℃冰箱。保质期为12月。七、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都必须注意：(a) 实验中须使用一次性吸头，吸取不同的试剂需更换吸头(b) 实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。(c) 处理好的样本应立即用于检测。谷物、玉米、饲料（稀释倍数：20）---取5g具有代表性的样品，用打碎机粉碎成过20目的样品，准确称取1g粉碎后样品；---加入20ml 10%甲醇水（见配液3），强力振荡10分钟，5000rpm离心10分钟后，取1ml上清液于2ml离心管中；---用1M HCl或1M NaOH调PH至7-8；---取50μl进行分析；注意：当样本检测吸光度值超出标准品范围时，请再次用10%甲醇水稀释，在计算时再乘上响应的稀释倍数即可。八、检测步骤1. 于适当测试孔分别加入50μL标准溶液 (0、2、4、8、20、100ppb)；2. 在另外的测试孔加入50μL已完成前处理的样品检测液；3. 再于每一测试孔另再加入100μL酶结合物，轻敲板子四周，使其充分混合后于25℃下避光静置40分钟；4. 将测试孔中反应液甩掉，用洗涤工作液（250μL/孔）洗涤微孔板4-5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体；5. 于每一测试孔中先加入50μL底物液A，再加 50μL底物液B，轻敲板子四周，使其充分混合，于25℃下避光静置15分钟；6. 加入终止液，每一测试孔加入50μL，在波长450 nm 下检测吸光度值，结果在5min中内读取；结果判定（1）百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双孔）除以第一个标准（0 标准）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值（%）＝	B	×100%
	B0

B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值B0—0(μg/kg)标准溶液的平均吸光度值（2）标准曲线的绘制与计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以玉米赤霉烯酮标准品浓度（μg/kg）的对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中氯霉素实际量。十、检测方法灵敏度、准确度、精密度试剂盒灵敏度：本试剂盒的玉米赤霉烯酮（Zearalenone）标准品最低检测下限为2ppb，此浓度之吸光值与阴性标准溶液（0 ppb）之吸光值有明显的差异。最高检测上限为100ppb，超出此浓度之检体需经适量稀释后再进行检测。回收率：谷物、玉米、饲料………………………………60%—110%精密度：试剂盒的变异系数均小于10%十一、注意事项1．试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。2．在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。3．每加一种试剂前需将其摇匀。4．反应终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。5．不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。6．储存条件   保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。7．试剂变质的迹象发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.8（A450nm<0.8）时，表示试剂可能变质。8．在加入显色液后，一般显色时间为10min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到15min（或更长）。反之，则减短反应时间。9．浓缩洗涤液如有结晶属正常现象，请加热溶解后使用。10．该试剂盒最佳反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。11．本试剂盒应用于筛查实际样品，检测若为阳性样品，应该用另一种方法如HPLC或LC/MS加以确证。十二、贮藏条件及保存期    贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。保存期：该产品有效期为12个月。