EB病毒VCA抗体IgA诊断试剂盒

EB病毒VCA抗体IgA诊断试剂盒

【药品名称】EB病毒VCA抗体(IgA)诊断试剂盒(酶联免疫法)
【汉语拼音】EB bing du VCA kang ti (IgA) zhen duan shi ji he(mei lian mian yi fa)
【英文名】Diagnostic Kit for IgA Antibody to EBV VCA(ELISA)
【用途】利用酶联免疫吸附法(ELISA)定性检测人血清中的EB病毒VCA IgA抗体。
【试验原理】
本试盒采用间接法原理检测人血清中的EB病毒VCA-IgA抗体，微孔中预包被EB病毒VCA抗原，首先加入待检标本的血清或血浆样品后，样品中的EBV VCA-IgA抗体被结合，未结合的其他成分将被洗涤除去，第二步，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的鼠抗人IgA抗体。最后用TMB底物显色。通过酶标仪检测吸光度(A值)从而判定样品中的EB病毒VCA IgA抗体的存在与否。
【主要组成成份】
1．抗原包被板 1块(48孔)
4×12孔板，微孔条可以拆开使用。包被板由板条和板架组成，与含有干燥剂的铝箔袋密封。未使用完的微孔条与干燥剂一起放在塑料自封袋中放置于2-8℃保存。包被板放置于自封袋保存后，减少开封次数，不良的保存条件将缩短稳定期。
2.阳性对照 1支(0.4ml)
为红色的液体，主要成份为蛋白缓冲稀释液稀释的EBV VCA-IgA阳性血清，含稳定剂、防腐剂。
3.阴性对照 1支(0.4ml)
为淡黄色的液体，主要成份为正常人血清，EBV VCA-IgA抗体阴性，含稳定剂、防腐剂。
4.酶标工作液 1瓶(6ml)
为红色的液体，主要成份为辣根过氧化物酶标记鼠抗人IgA抗体，含稳定剂。
5.浓缩洗涤液(20×) 1瓶(15ml)
为无色液体，成份为磷酸盐缓冲液和吐温20。用前用蒸馏水或去离子水按照1:20的比例稀释。
6.底物液A 1瓶(3ml)
为无色液体，主要成份为过氧化脲。
7.底物液B 1瓶(3ml)
为无色液体，主要成份为TMB。
8.终止液(2M H₂SO₄) 1瓶(3ml)
为无色液体，主要成份为2M H₂SO₄
9.标本稀释液 1瓶(6ml)
为淡黄色一体，含蛋白稳定剂和防腐剂
10.自封袋 1个
将微孔板装入自封袋，封紧袋口。
11.封板膜 3张
在温育时防止水份蒸发和污染。
【适用仪器及所需材料】
1、蒸馏水或去离子水 2、一次性手套和定时器
3、吸水纸 4、25ml、100ml、1000ml刻度量筒
5、酶免自动仪器或者手持单道/多道移液器 6、适用于盛放污物的容器
7、温箱或水浴箱 8、用于混合微孔内液体的振荡器
9、全自动、半自动、手工洗板系统 10、酶标仪，单波长450nm或双波长450/630nm。
【样本要求】
1、血清和血浆都可以用来检测，新鲜采集的标本应先充分离心，然后取澄清的液体进行检测，如果未充分沉淀，悬浮的纤维蛋白可能引起假阳性。
2、胆红素、血红蛋白、脂肪或蛋白含量高的样品通常不会影响试验结果。
3、HCMV、HSV及VZV病原体对本品检测通常不会有影响。
4、标本储存在2-8℃，一周内不需要检测的标本应储存在-20℃以下，避免反复冻融。
【试验方法】
1．取出试剂盒置室温平衡30分钟。将20×洗涤液用蒸溜水做20倍稀释。
2．加样品:将待检血清做1:10稀释(取100ul标本稀释液加入反应板孔内，再加入10ul待检血清)混匀,同时预留阴、阳性及空白对照3-5孔。
3．加入阴性对照1-3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。将反应板轻轻震荡使样品混匀。
4．温育:用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应30分钟。
5．洗板:温育后,将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次浸泡30—60秒钟。
6．加酶标工作液:每孔加入100ul酶标工作液，空白孔除外。
7.温育:用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应30分钟。
8.洗板:温育后,将封板膜揭掉，吸干孔内液体，用洗涤液洗板5次，每次浸泡30—60秒钟。
9.显色:每孔加入底物A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，用封板膜封板后，置37℃温箱或水浴中反应15分钟。
10.终止:每孔加入终止液50ul，轻轻震荡混匀。
11.测定:设定酶标仪波长于450nm(建议双波长450/630nm检测)，测定各孔A₄₅₀值。注意:在终止反应30分钟内读数。
12.当使用单波长时，校准空白孔，设定酶标仪波长于450nm,测定各孔A₄₅₀值，当使用双波长450/630nm检测时，可以不设空白孔，直接测定各孔A值。
【结果判定】
1.每个试验结果独立使用，通过(Cut off)值判定结果。
2.计算临界值:
Cut off(C.O)=0.10+阴性对照平均(NC)A₄₅₀值(当阴性平均A₄₅₀值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均A₄₅₀值大于或等于0.05时按实际值计算)
3.质量控制:
3.1空白孔(只加显色剂和终止液)的吸光度值应不大于0.08。
3.2阳性对照(PC)A₄₅₀值大于0.80。
3.3阴性对照平均A₄₅₀值小于0.08。
如果质控是有效的，试验结果就是有效的。
4.结果判定
阴性结果:标本吸光度值＜临界值为阴性。
阳性结果:标本吸光度值≥临界值为阳性。
【对试验结果的解释】
阴性结果代表标本中未检测出EBV VCA-IgA抗体，阳性结果代表标本中检测出EBV VCA-IgA抗体，EBV VCA-IgA抗体阳性是EBV既往感染的指标之一，EBV VCA-IgA抗体阳性要定期随访观察，必要时进行相关疾病的其它检查。
【该试验方法的局限性】
1.所有高敏感性的免疫实验系统，都潜在非特异性，因此不可接受的阳性结果可能是由于ELISA方法的生物学假阳性造成的。
2.任何阳性结果均需要与临床信息联系来判定。
【产品性能指标】
1.灵敏度分析
100例EBV VCA-IgA抗体阳性血清检测结果如表1
表1: 灵敏度分析(检测阳性数/阳性血清总数)
2.特异性分析
991例EBV VCA-IgA抗体阴血清检测结果如表2。
表2:特异性分析
【注意事项】
1.抗体测定结果的判断必须以酶标仪读数为准。
2．任何血清都应作为具有传染性样品对待。
3．试剂盒置2—8℃保存，有效期6个月，请于有效期内使用。
4．不同批号试剂请勿混用。
5．严格按说明书操作，反应温度和时间必须严格控制。
6．请将拆封后未用完的包被板放入塑料袋内封紧保存。
7．实验用的血清及废弃物均应经灭菌后再处理(121℃ 20分钟)。
【包装、规格】
48人份/盒
【贮存】
于2-8℃避光保存。

【生产企业】 广州健仑生物科技有限公司
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