本试剂盒包括在水产,畜禽组织等生物样品中酶免定量分析检测硝基呋喃唑酮的代谢残留物AOZ所需的试剂以及程序说明。本试剂盒检测样本的数量:96孔(含标准孔)检测所需时间:40分钟
1 概述硝基呋喃是一类人工合成的广谱抗菌药物,被普遍使用于饲料添加,用于治疗猪、禽、牛等沙门氏菌和埃希氏菌引起的细菌性肠炎,同时也作为一种生长促进剂。1995年欧盟禁止此类药物用于动物饲养。我国也将此类药物列入禁用清单。硝基呋喃类药物在动物体内很快代谢,AOZ是呋喃唑酮的代谢物。本方法采用酶联免疫一步分析法,可以在短时间内大量检测生物样本中的
AOZ。
2 使用领域本试剂盒适用于定量检测各种水产、畜禽组织等生物样品中的AOZ。
3 检测原理反应在已包被有AOZ多抗的塑料微孔中进行,将AOZ标准品或样品、酶标物加入微孔,温浴时,游离的和酶标记的
AOZ竞争结合AOZ抗体的结合位点。所有未反应的酶标物在洗涤步骤中被清除,结合了的酶可以由显色剂显示出来,因为酶可以使无色的显色剂转变成蓝色,反应终止液的加入则可以使蓝色变成黄色,吸收值可以在450nm处进行测定。颜色变化的程度反映样品中
AOZ的含量。
4 提供的试剂4.1 微孔板:96孔(12条×8孔)包被有4-NP-AOZ多抗
4.2 AOZ标准品:0ng/ml; 0.025ng/ml;0.05ng/ml; 0.15ng/ml; 0.45ng/ml; 1.35ng/ml; 4.05ng/ml;各1ml/瓶
4.3 酶标物浓缩液:1瓶(10×,1.2ml),
4.4 酶标物稀释液:1瓶13mL
4.5 样品稀释浓缩液:1瓶(5×,50mL)
4.6 洗涤液:10×,1瓶50mL
4.7 显色剂:1瓶13mL
4.8 反应终止液:1瓶13mL
4.9 4-硝基苯甲醛: 15.1mg
5 需要而未提供的材料:5.1 10~200μl不同的微量进样器
5.2 50~200μl多通道微量进样器
5.3 甲醇(分析纯)
5.4 蒸馏水
5.5 1M HCl
5.6 0.1M的K
2HPO
45.7 1M的NaOH
5.8 乙酸乙酯
5.9 正己烷
5.10酶标仪(有450nm滤光片)
5.11振荡器
5.12氮吹仪
5.13水浴锅
6 试剂配制:配液1: 衍生化试剂(现用现配)
向装有4-硝基苯甲醛的试剂瓶中先加3ml甲醇溶解充分,最后用甲醇定容至10ml(浓度为10mM)。注意避光保存。配液2: 0.1M 磷酸氢二钾溶液称取2.28g 三水合磷酸氢二钾加去离子水定容至100mL。配液3: 1M盐酸溶液
量取8.7ml浓盐酸加去离子水定容至100ml。配液4: 1M氢氧化钠
称取4.0g氢氧化钠加去离子水定容至100ml。
7 贮存7.1 试剂盒贮存于2~8℃,切勿冷冻
7.2 未用完的微孔板应该密封干燥保存
8 注意事项8.1 反应终止液和显色液是有毒性的,切勿接触皮肤
8.2 不要在有效期过后使用试剂
8.3 不同批号的试剂盒中的试剂不得混用
8.4 使用试剂盒前请详细阅读说明书