过敏原特异性IgE抗体检测试剂盒
说明书
本试剂盒采用管式酶免(ELISA)分析法,对人血清或血浆中的过敏原特异性IgE 抗体进行定性/半定量检测。
[概述]
美国CORTEZ IgE抗体存在于具有过敏体质个体的血清中,这些个体在接触到特异性过敏原时主要出现速发型过敏反应的症状。对血清中总IgE抗体水平的检测,可为判定机体对过敏的易感性提供有价值的信息。而对血清中特异性过敏原检测可对患者进行脱敏治疗提供有力的依据。皮试是常用的一种简单,低成本的体内过敏原检测方法,但皮试存在准确性低,结果不易判断以及危险性较大等缺点。体外检测中的放射过敏吸附试验(RAST),荧光酶标法(FEIA)和酶标法(ELISA)已被用于定量检测来源于不同过敏原的IgE抗体。过敏的临床症状主要包括过敏反应、花粉热、气喘、过敏性湿疹、皮炎、呼吸不畅和鼻炎。通过检测大部分常见的过敏原或总IgE抗体来诊断过敏反应,就能更好地预防和治疗。本试剂盒是一种体外定性/半定量的酶免法,可同时独立地检测各种常见的过敏反应,并估计人血清或血浆中IgE的总水平。这种独特的装置由一只反应管组成,反应管中含有一系列塑料段,在这些塑料段的表面包被有单一过敏原或过敏原混合物或单克隆抗体,这样,患者血清中的IgE抗体就可以与它们分别反应形成免疫复合物而沉淀下来。由于过敏原的选择不同,本试剂盒检测的具体内容有多种形式。每个反应管均带有阳性、阴性对照,有助于结果的分析。
[原理]
当具有过敏抗原固化于表面的载体与病人血清培养在一起后,血清中特异性IgE(一抗)就会特异地结合到抗原上,此特异结合的抗体可被酶联的二抗所识别,加入显色剂后,二抗所联的酶使显色剂由黄色变成紫色。显色的深度与血清中特异性IgE成正比;能半定量地检测血清中特异性IgE的浓度。
[贮存] 收到试剂盒后,应将试剂盒贮存在2-8℃。
[标本收集] 患者无需特殊的准备,也无需禁食。使用血清或血浆。标本不需稀释,反应管内吸入标本量约600l。试验前,血清或血浆应密闭保存在4-8℃中,至多5 天。标本可在-20℃中保存3个月,但应避免反复冻融。
[试验操作] 使用前须平衡至25-30 ℃。
1.去掉尾端的封头和顶端的塞子,让反应管内的保存液排出。用纱布擦试细头。
2.将注射器接在反应管的顶端,将标本由细头抽到注射器接头处,不要将标本抽入注射器并避免气泡抽入反应管内。将反应管平放,在室温下(25-30℃)反应2小时。
3.将标本从反应管排出,抽出注射器的推杆,由注射器针筒向反应管内注入1 毫升清洗液清洗液让流尽,将注射器的推杆插入并推到底,用纱布擦试细头。
4.将绿色的酶联二抗由细头抽到注射器的接头处,并避免气泡抽入反应管内。将反应管平放,在室温下(25-30℃)反应 4-10 小时。
5.将酶联二抗由反应管排出,抽出注射器的推杆。加五滴清洗液到注射器针筒中,让它流下。再在注射器针筒内注入1毫升清洗液,让它流过反应管。将注射器的推杆插入并推到底,
用纱布擦试细头。
6.在塑料烧杯中注入少量(约2 毫升) 清洗液。通过反应管将清洗液抽到注射器中。抽出注射器的推杆,让清洗液流出。
7.在注射器针筒内注入1 毫升清洗液,让它自然流下。重复一次。将注射器的推杆插入并推到底,用纱布擦试细头。
8.将黄色的底物/指示剂通过反应管抽到注射器中。
9.平放反应管,强阳性标本在几分钟内可观察由黄到紫的颜色变化,弱阳性标本可在90 分钟内观察颜色变化。
注意:为了观察到明显的颜色变化,一旦加入底物/指示剂后,请勿动反应管,避免晃动管内液体。
[结果解释]
本试剂盒是一种定性/半定量试验,用来检测血清标本中IgE抗体的水平。对特殊过敏原的强烈过敏反应,会在几分钟内很快地出现较深的紫色。弱的过敏反应出现颜色变化的时间要长。阴性结果的颜色与其两边的隔离带的颜色一样。出结果的最佳时间是在加入底物/指示剂30分钟时。在这段时间内,含有来源于(针对)一种或多种过敏原(产生的)IgE 抗体的血清,无论IgE 抗体水平是正常或已升高,都会在任何相应反应部分出现特异性的紫色。抗体水平非常低时,可将显色时间适当延长到90 分钟,也会出现结果,只要特异性的反应颜色能和反应管中其它部分非特异性的背景区分开即可判断为阳性结果。
本试剂盒中含有多种过敏原,以便尽可能检测出IgE 介导的过敏反应的患者。反应部分的阳性结果,并不能排除患者对其它不包含在这试验中的过敏原的敏感性,尤其是树木过敏原的免疫原性交叉反应是很局限的。同样,阴性的结果并不能说明患者对其它过敏原不敏感。
[注意事项]
1. 本试剂盒仅供体外检测用. 失效期后的产品请勿使用.
2. 检测板不能重复使用, 也不能供一个以上的样品同时使用. 本试剂盒内各
种试剂不能与其它试剂混用。
4. 操作过程中有可能与病人的血清接触, 建议操作时戴上一次性医用手套.
5. 所有操作均应按照本说明书的步骤进行, 酶联反应中抗原抗体反应是不可
逆的, 要严格注意加样顺序, 不能颠倒.
6. 在检测操作过程有3次加样步骤, 即加标本(血清), 酶结合物, 显色剂. 每
次加样均由与检测板相连的1毫升注射器平稳吸入, 一般加样至注射器接
口, 加入标本或酶结合剂后应仔细检查, 如发现在检测片段表面有气泡,
应将试剂排回试剂瓶后直接重新加样.
7. 实验过程靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物目的. 通过洗涤以清
除残留在检测板中的没能与固相抗原或抗体结合的物质, 以及在反应过程
中吸附于固相载体的干扰物质(蛋白质等), 洗涤是检测操作的关键步骤,
为防止因清洗不彻底导致游离酶残留在管内, 而造成非特异性显色, 操作
者应严格按要求洗涤。