1、检测原理
氟喹诺酮类快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理,样本中的氟喹诺酮在流动的过程中与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合,抑制了抗体和NC膜检测线上氟喹诺酮-BSA偶联物的结合。如果样本中氟喹诺酮含量较高,检测线T比质控线C浅或者T线不显色,结果为阳性。反之,检测线T显色与质控线C线相当或者比C线深,结果为阴性。
、样品收集及处理
鱼、虾、蟹等水产收集于干净的容器或自封袋中;若不能及时送检,样本应该去除脂肪,用剪刀剪碎或者用绞肉机搅碎后,分装保存于-20℃下,忌反复冻融。
3.1 组织(鱼、鸡、猪)
⑴ 取一定的组织(鱼、鸡、猪)去除脂肪后,用剪刀剪碎或者用绞肉机搅碎;
⑵ 取3 g已处理待测样品于50 mL离心管中;
⑶ 加入一瓶提取剂A,震荡混匀2分钟;
⑷ 4000转离心5分钟,取上层液3 mL至另一50 mL离心管中并加入一瓶提取剂B,轻摇混合(避免剧烈震荡);
⑸ 4000转离心5分钟,取下层液1 mL至10 mL离心管中,于60 ℃下,利用氮气或空气将溶液吹干;
⑹ 移液器准确加入500 µL样品复溶液及加入1 mL正己烷复溶,震荡混匀1分钟;
⑺ 4000转离心1分钟(如果分层不明显可延长离心时间至5分钟)或静置至明显分层,至少取150 µL下层液待测。
3.2 虾、蟹
⑴ 取一定量的水产样本(虾、蟹)去除脂肪后,用剪刀剪碎或者用绞肉机搅碎;
⑵ 称取2 g已处理待测样品于50 mL离心管中;
⑶ 加入一瓶提取剂B,震荡混匀2分钟;
⑷ 4000转离心5分钟,取下层液0.5 mL至10 mL离心管中,于60 ℃下,利用氮气或空气将溶剂吹干;
⑸ 移液器准确加入500 µL样品复溶液及加入1 mL正己烷复溶,震荡混匀1分钟;
⑹ 4000转离心1分钟,至少取150 µL下层液待测。
4、操作步骤以及结果判读
⑴ 测试前将未开封的检测卡及待检样品溶液恢复至室温;
⑵ 从原包装铝箔袋中取出检测卡,在半小时内使用;
⑶ 将检测卡平放,用塑料吸管垂直滴加4滴无气泡样本(约120 µL)于加样孔;
⑷ 反应7-10分钟根据示意图判断结果,超过15分钟判读无效;
阴性结果: T线比C线深,或一样深,表示样品氟喹诺酮类浓度低于其灵敏度;
阳性结果: T线比C线淡,表示样品氟喹诺酮类浓度高于其灵敏度;
无效反应: 如果测试结果C线未出现,表示此试剂已失效。
阴性 阳性 失效
5、检测灵敏度
药物 | 呈阳性反应浓度 |
Enrofloxacin(恩诺沙星) | 3 μg /L |
Ciprofloxacin(环丙沙星) | 3 μg /L |
Danofloxacin(单诺沙星) | 3 μg /L |
Norfloxacin(诺氟沙星) | 6 μg /L |
Oxolinic acid(恶喹酸) | 12 μg /L |
Ofloxacin(氧氟沙星) | 5 μg /L |
Lomefloxacin(洛美沙星) | 12 μg /L |
Fleroxacin(氟罗沙星) | 12 μg /L |
Enoxacin(依诺沙星) | 12 μg /L |
Flumequine(氟甲喹) | 5 μg /L |
Nalidixic acid(萘啶酸) | 40 μg /L |
Gatifloxcin(加替沙星) | 20 μg /L |
Levofloxacin(左氧氟沙星) | 20 μg /L |
Pefloxacin(培氟沙星) | 20 μg /L |