Agilent ZORBAX Eclipse XDB 色谱柱(C18、C8、苯基和氰基)提供四种键合固定相,用于方法开发优化。这些色谱柱可在宽pH 范围(pH 2-9) 内提供良好的峰形,用一系列色谱柱可进行灵活的其他方法开发。Eclipse XDB 色谱柱可以在低pH (2-3) 条件下用于方法开发,且同样的色谱柱还可以在中等pH (6-8) 范围内用于方法开发。在中等pH 范围内,残留硅醇基活性更大,且更容易发生相互作用,造成峰拖尾。为了克服这些相互作用,Eclipse XDB 色谱柱通过专利工艺进行超密键合和双封端,以覆盖尽可能多的活性硅醇基。最终碱性化合物在pH 2-9 范围内具有出色的峰形。可提供粒径为1.8、3.5、5 和7um 的Eclipse XDB 色谱柱,实现高速、高分离度、分析和制备放大分离。
ZORBAX Eclipse XDB-C8
ZORBAX Eclipse Plus C8 柱有几种填料粒径和柱尺寸,是提高效率的良好工具。它们分离酸性、中性和碱性化合物都有良好的峰形。是方法开发的首选色谱柱。
Eclipse Plus C8 的选择性
色谱柱的选择要考虑到一些因素。选择性是进行色谱柱选择最重要的因素之一。选择性系数(α)是两个峰的
相对保留值:α = k2 / k1在这里k2 和k1 分别是第二个洗脱出来的峰和第一峰的保留因子,也称容量因子。如果这两个峰一起被洗脱,α 为1 ;对这两个紧密相邻的峰来说,选择性接近1。选择性,或峰间距,可以通过改变温度、流动相或固定相(色谱柱)进行调节。因为选择性体现了分析物与固定相/流动相之间的相互作用,所以难以理解、也很难预测,常常需要通过实验进行优化。有各种柱子可供选择,这是改变α的有力而容易的办法,尤其是因稳定性、溶解度、pH 或其它局限无法改变流动相时。图1 显示了在同样的色谱条件下,Eclipse
Plus C8 柱、Eclipse Plus C18 柱,和Eclipse XDBC8 柱的不同选择性。Eclipse Plus C8 柱与EclipseXDB-C8 柱相比,虽然对三种非常难分离的化合物来说,α仅改变了6%,但分离度增加了1 倍,从1.23 增至2.42。
这些柱子都有相似之处,如,同样以ZORBAX硅胶为基质,都采用的是安捷伦控制的生产技术,因此,可以预
计其洗脱顺序也比较相似,如图所示。但它们之间也有明显的不同,例如,Eclipse Plus 柱和Eclipse XDB 柱采用的专利的硅胶处理和键合技术不同,C18 和C8的官能团也不同。这些差异反映为选择性的不同,进而将改善分离度。对于a接近1 的紧密相邻峰,a的微小变化将对分离度产生极大的影响,例如在这个例子中,a 从1.07变为1.14,分离度就从1.15 增加到2.42。
碱性化合物的出色峰形
Eclipse Plus 柱(C8 和C18)的最显著的特点是分离各种类型样品:酸性、碱性和中性样品,都能得到出色的峰形。在上述例子的各图中都列出了用美国药典拖尾因子计算表示的峰形。每个例子中,都接近于理想状态(1.0)。高性能+峰形,柱效和分离度+均归功于全程严格控制的、改进的专利硅胶生产和键合技术。碱性化合物(特别是含氨基的分子)的高效反相色谱分离经常很困难。在低pH条件下(pH < 3),碱发生质子化(BH+),因而水溶性很强,保留较差。在pH 7时,某些氨基可能仍然质子化,而其它的则失去其质子(B)。硅胶上没有反应完全的硅醇基呈离子型(SiO-),将与质子化的离子样品发生相互作用。这种离子交换二级反应将导致峰拖尾。在低pH 条件下,硅醇基未离子化(SiOH),与碱性分析物不发生相互作用。Eclipse Plus进行了独特的ZORBAX硅胶处理、封端和键合,降低了离子化硅醇基的相互作用,显著改善了峰形。
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