副溶血弧菌核酸扩增（PCR）检测试剂盒【产品名称】通用名称：副溶血弧菌核酸扩增（PCR）检测试剂盒英文名称：Nucleic acid amplification (PCR) diagnostic kit for
Vibrio parahaemolyticus【包装规格】20次/盒
【预期用途】用于临床样品以及环境样品中的副溶血弧菌的检测。
【检验原理】试剂盒使用副溶血弧菌的特异引物，可与样本中的副溶血弧菌基因组的相应靶位点特异性结合，利用PCR反应达到对副溶血弧菌快速检测的目的。试剂盒具有特异性强的特点，可以将副溶血弧菌从其它细菌中特异地区分出来。
【主要组成部分】 | 副溶血弧菌核酸扩增（PCR）检测试剂盒 | 组 份 | 规 格 | 数 量 | 贮存温度 |
| 核酸提取液 | 1ml/支 | 2支 | -20℃ |
| 副溶血弧菌 PCR反应液 | 500μl /支 | 1支 |
| Taq酶 | 12μl /支 | 1支 |
| 副溶血弧菌阳性对照品 | 100μl /支 | 1支 |
| 阴性对照品 | 100μl /支 | 1支 |
【储藏条件及有效期】 -20℃保存
，避免反复冻融，有效期一年。
【适用仪器】普通PCR仪
【样品处理】（1）取培养后的菌液约1.5ml，12000rpm离心2min，弃上清。（2）加入200μl无菌水，充分混匀，12000rpm离心2min，弃上清。（3）加入80μl裂解液，用移液器吹吸混匀，50℃水浴1小时，100 ℃水浴15分钟，冰上放置10分钟后12000rpm离心3min。（4）取上清液用于PCR检测
【使用方法】1. 试剂配制（试剂准备区）从试剂盒中取出PCR反应液在室温融化，将PCR反应液充分震荡混匀，所有试剂在使用前2000rpm离心10s。设所需要的管数n（n=样本数+1管阳性对照品+1管阴性对照品），每个测试反应体系试剂配置如下表。计算所需要的n管反应的各试剂的使用量，加入至适当体积的无菌离心管中，充分混合均匀，分装至无菌PCR反应管中，每管20μl。
| | PCR反应液 | Taq酶 |
| 每个反应体系试剂用量 | 19.7μl | 0.3μl |
2. PCR扩增（扩增和产物分析区）将样本、阴性对照品和阳性对照品使用前恢复至室温，2000rpm离心10s。向每个PCR反应管中分别加入样本、阴性对照品和阳性对照品各5μl，震荡混匀，于2000rpm离心10s。将PCR管放入PCR仪中，使用以下程序进行扩增反应，整个扩增反应约需2小时：
Step 1
94℃
5min Step 2 94℃
30s Step 3 60℃
30s 33 个循环
Step 4 72℃
20s Step 5 72℃
5min3. 结果判断（扩增和产物分析区）从PCR管中取出2μl PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测。在紫外灯下，阴性对照品没有任何条带；副溶血弧菌阳性对照品具有大小为181bp的条带。当被检样品经电泳检测出现仅出现181bp大小的条带时则属于副溶血弧菌阳性；当未出现条带或所出现的条带大小与阳性对照品的条带大小不一致时均视为阴性结果。
【注意事项】1. 实验前请仔细阅读本说明书。
2. 本试剂盒不做临床诊断。
3. 实验室管理应严格按照PCR基因扩增实验室的管理规范，试验人员必须进行专业培训，实验过程中严格分区进行（试剂准备区、样本制备区、扩增和产物分析区），实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备，各区用品不能交叉使用。
4. 样本准备和试剂准备阶段应使用生物安全柜，实验过程中穿工作服，带一次性手套，使用自卸管移液器。
5. 对每次实验进行质量控制。
6. 试剂使用前要完全解冻，并混合均匀，但应避免反复冻融。
7. 样本制备区所用过的吸头请打入盛有消毒剂的容器，并与废弃物一起灭菌后方可丢弃。
8. 实验完毕用10%次氯酸或75%酒精或紫外灯处理工作台和移液器。
9. 所有检测样品应视为具有传染性物质，操作和处理均需符合相关法规要求：卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通用准则》和《医疗废物管理条例》。
【生产企业】 天津生物芯片技术有限责任公司地址：天津经济技术开发区宏达街23号一区邮编：300457网址：
http://www.tjbiochip.com电话：（022）66229538传真：（022）66226983
点击图片查看原图
