一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的4种试剂(表1)、10瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、10支一次性吸管。二)西林瓶的使用方法开启西林瓶前,用75%酒精棉消毒西林瓶表面,在无菌条件下,按铝盖上的箭头方向打开铝盖,撕开铝盖,打开西林瓶胶塞(如左图)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。三)大肠杆菌IMVC生化鉴定盒的详细使用方法大肠杆菌IMVC为从粪大肠菌群检测结果中进一步鉴别大肠杆菌和非大肠杆菌。从产气EC肉汤管中接种伊红美蓝平板,35-37℃培养24h,从平板上挑取可疑菌苔接种于营养琼脂斜面, 35-37℃培养18-24h。从营养琼脂斜面上挑取菌苔置于已配备的无菌生理盐水中,与0.5 McFarland的浊度管比浊,将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL ),用吸管吸取2滴(约0.06mL)菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞,一般采用全加塞(如右图左两瓶所示),特殊情况在下表注明采用半加塞(如右图右两瓶所示),直立于内托的凹槽内(如右图),或放置于合适的瓶架中,于35-37℃培养箱中培养,结果观察见表1。注意:如有特殊的接种方式、培养时间或培养方式,请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1 大肠杆菌和非大肠杆菌生化鉴别
产品名称 | 结果判定 | 培养时间 (小时) | 使用说明 | |
阳性 | 阴性 | |||
蛋白胨水(色氨酸肉汤) | 红色 | 不变色 | 24 | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加靛基质试剂2-3滴,立即观察结果。 |
葡萄糖磷酸盐胨水(MR-VP培养基) | MR: 红色 | 不变色 | 96 | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后加MR试剂2-3滴,立即观察结果。 |
VP: 红色 | 不变色 | 48 | 西林瓶半加塞(如图2右两瓶所示)培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液,混匀,再培养10-20分钟观察结果。 | |
Koser氏枸橼酸盐 | 生长 | 不生长 | 24-48 |
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