5×蛋白上样缓冲液(配β-巯基乙醇) 产品组成 产品组成 | 规格 | 保存温度 | 5×蛋白上样缓冲液 | 10ml | 2value="8" hasspace="False" negative="True" numbertype="1" tcsc="0">-8℃ | β-巯基乙醇 | 1ml | 常温 | 产品简介: 本产品适用于SDS-PAGE(SDS变性聚丙烯酰胺凝胶电泳)时作蛋白质上样用。其主要成份为SDS,β-巯基乙醇,溴酚蓝,缓冲盐溶液等。 SDS可与蛋白质结合使蛋白质-SDS复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被SDS掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异,SDS还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构,β-巯基乙醇可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。 保存时间: 未混合前2-8℃可保存一年,混合后保存三个月。 使用说明: 1. 根据用量,以每1ml的5×蛋白上样缓冲液加入50ulβ-巯基乙醇,混匀。此即为配好的蛋白上样缓冲液。此配好的蛋白上样缓冲液在2-8℃保存三个月。 2. 请按每40微升蛋白样品加入10ul配好的上样缓冲液的比例来使用。如果蛋白浓度过高,可用双蒸水稀释。 3. 混匀后,value="100" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">100℃水浴加热3-5分钟,使蛋白变性。 4. 冷却到室温后,离心数秒后,混均再离心30秒取上清直接上样即可。 注意事项: β-巯基乙醇味道特别难受,所有操作最好是在通风柜中操作。如果没有通风柜,也尽量找一通风处操作,或者使用5×蛋白上样缓冲液(含DTT)。 8%胶时溴酚蓝大概在30kd左右, 12%胶时,约在20kd左右,15%胶时,大概在10kd。请根据自己目标条带来判断结果电泳时间。 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 |