现如今,人们在工作生活中的疲劳感日益加剧,各种抗疲劳功能的保健食品应运而生。因此,来自集美大学食品与生物工程学院的何传波、魏好程、熊何健等人以海参内脏为原料,通过中性蛋白酶水解,结合超滤和冷冻干燥工艺制备海参内脏酶解产物,利用高效液相色谱法测定酶解产物的分子质量,并通过动物实验探讨酶解产物的抗氧化、抗疲劳活性,为海参内脏的高值化综合利用提供数据支持。
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酶解产物的理化指标
酶解产物中粗蛋白质含量最高,为73.02%,其次是灰分(13.09%)。水分和多糖含量分别为7.20%和5.96%。
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酶解产物的分子质量分布
海参内脏酶解产物的分子质量主要分布在187~998 D。
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体内抗氧化活性分析
3.1 内脏酶解产物对小鼠体质量的影响
小鼠体质量的变化反映了海参内脏酶解产物对小鼠健康状况的影响,小鼠体质量增加或者减少过快,都不利于其健康。随着灌胃时间的延长,小鼠体质量逐渐增加,且各组小鼠体质量每周增加幅度差异不显着(P>0.05),其中酶解产物各剂量组与空白照组相比均没有达到显着性差异(P>0.05)。观察小鼠行为特征,未发现异常或死亡现象,表明灌胃海参内脏酶解产物并不会影响小鼠正常生长,对小鼠无毒副作用。
3.2 酶解产物对小鼠肝脏MDA含量的影响
模型对照组的肝脏MDA含量为5.03 nmol/mg pro,比空白对照组增加了17.80%,差异极显着(P<0.01),说明造模过程对小鼠造成了显着的氧化损伤,造模良好。酶解产物低、中、高剂量组的肝脏MDA含量分别比模型对照组降低了15.71%、35.79%和20.28%,且都与模型对照组具有极显着性差异(P<0.01)。说明海参内脏酶解产物具有良好的清除MDA的能力,能较好地保护肝脏细胞免受自由基攻击,具有一定的抗氧化活性。
3.3 酶解产物小鼠对肝脏SOD活力的影响
与空白对照组相比,模型对照组小鼠肝脏内SOD活力极显着降低(P<0.01),说明利用乙醇氧化损伤造模成功。酶解产物的3 个剂量组SOD活力较模型对照组极显着升高(P<0.01),分别比模型对照组上升了18.46%、54.12%和38.36%。酶解产物中剂量组SOD活力最高,且与低、高剂量组存在显着差异(P<0.05)。
3.4 酶解产物对小鼠肝脏GSH含量的影响
与空白对照组相比,模型对照组肝脏GSH含量极显着降低(P<0.01)。酶解产物低、中剂量组小鼠肝脏中GSH含量与空白对照组相近,而高剂量组则比空白对照组提高了约50%。3 个剂量组的GSH含量均极显着高于模型对照组(P<0.01),分别提高了122.42%、128.48%和223.74%。说明海参内脏酶解产物具有提高肝脏中GSH含量的作用,并且能够帮助氧化损伤机体GSH含量恢复正常水平。
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抗疲劳活性分析
4.1 酶解产物对小鼠力竭游泳时间的影响
酶解产物中剂量组的小鼠平均力竭游泳时间最长,为81.28 min,相当于空白对照组的2.08 倍,低、高剂量组小鼠的平均力竭游泳时间分别相当于空白对照组的1.81和1.66 倍,3 个剂量组与空白对照组之间均有极显着差异(P<0.01),说明海参内脏酶解产物能够显着延长小鼠的力竭游泳时间,具有一定的抗疲劳效果。
4.2 酶解产物对小鼠血清LA含量的影响
空白对照组的LA含量最高,为16.17 mmol/L,3 个剂量组分别比空白对照组的LA含量降低了22.51%、23.19%和21.58%,且与空白对照组之间具有极显着差异(P<0.01),说明海参内脏酶解产物可以显着降低运动小鼠血清中LA的含量,对缓解或者消除LA在小鼠体内的堆积,具有一定的抗疲劳效果。
4.3 酶解产物对小鼠BUN含量的影响
空白对照组具有最高的BUN含量, 为6.71 mmol/L,低、中、高3 个剂量组的BUN含量分别比空白对照组下降了12.67%、13.11%和17.14%,且都与空白对照组具有极显着性差异(P<0.01)。说明海参内脏酶解产物能够显着降低运动小鼠BUN的含量,具有一定的抗疲劳活性。
4.4 酶解产物对小鼠肝糖原含量的影响
空白对照组肝糖原含量最低,为5.50 mg/g,3 个剂量组的肝糖原含量分别比空白对照组提高了30.73%、58.36%和26.91%,且都与空白对照组具有极显着性差异(P<0.01)。说明海参内脏酶解产物能够增加肝糖原的储备,提高机体的运动耐受能力,增强机体抗疲劳能力,具有很好的抗疲劳活性。
结 论
海参内脏酶解产物中蛋白质含量为73.02%,以分子质量分布在187~998 D的小分子肽为主,该部分峰面积占总面积的77.9%。酶解产物具有一定的抗氧化活性,不同剂量(200、400、800 mg/(kg·d))的酶解产物均能降低小鼠肝脏的丙二醛含量,增加超氧化物歧化酶活力和还原型谷胱甘肽含量,且与模型对照组相比,差异均达到极显着水平(P<0.01),说明海参内脏酶解产物能有效恢复氧化损伤机体抗氧化指标。海参内脏酶解产物具有一定的抗疲劳功效,3 个剂量组均能极显着延长小鼠的力竭游泳时间和提高运动小鼠的肝糖原含量,降低其血清乳酸和血清尿素氮含量(P<0.01)。