来自吉林农业大学食品科学与工程学院的夏炎、管晓辉、崔艳艳等人以蒲公英为原料,提取TG并纯化,以LPS刺激小鼠RAW264.7巨噬细胞建立体外炎症模型,对TG的抗炎效果及其相关作用机制进行研究,为今后有关TG的抗炎效果及其机理的研究提供参考依据。
1TG对RAW264.7细胞活性的影响
TG质量浓度在0~1 000μg/mL的范围内,对RAW264.7细胞活性没有影响,故选择TG质量浓度250、500、1 000 μg/mL作为低、中、高剂量,即TG组所用的质量浓度。
2TG对RAW264.7细胞分泌NO的影响
TG预处理细胞1 h后,与LPS组相比,中、高剂量组处理均能极显着地降低NO的分泌量(P<0.01),而低剂量组与LPS组相比差异不显着(P>0.05)。
3TG对RAW264.7细胞iNOS的mRNA表达的影响
TG组呈剂量依赖关系抑制iNOS的mRNA表达,与LPS组相比较,低、中、高剂量组均有一定的抑制作用,高、中剂量组的作用极显着(P<0.01),低剂量组无显着抑制作用(P>0.05)。
4TG对RAW264.7细胞TNF-α的mRNA表达的影响
TG组呈剂量依赖关系抑制TNF-α的mRNA的表达。与LPS组相比较,低剂量组的抑制作用显着(P<0.05),而高、中剂量组的抑制作用极显着(P<0.01)。
5TG对RAW264.7细胞IL-6的mRNA表达的影响
TG组呈剂量依赖关系抑制IL-6 mRNA的表达。与LPS组相比较,高剂量组的抑制作用极显着(P<0.01),低、中剂量组抑制作用显着(P<0.05)。
6TG对RAW264.7细胞TNF-α分泌的影响
TG组呈剂量依赖关系抑制P-IκB-α蛋白的表达,与LPS组相比,低剂量组中P-IκB-α蛋白表达显着降低(P<0.05),中剂量组的抑制作用极显着(P<0.01),高剂量组的抑制作用高度显着(P<0.001)。
LPS组的IκB-α蛋白的表达量极显着降低(P<0.01),加入TG后,中、高剂量组的IκB-α的表达量高度显着增加(P<0.001)。结果表明TG可以有效抑制IκB-α的磷酸化。
7TG对RAW264.7细胞TNF-α分泌的影响
TG组呈剂量依赖关系抑制TNF-α分泌,且差异显着(P<0.05)或极显着(P<0.01)。其中,250、500、1 000 μg/mL的TG处理时,与LPS组相比,对TNF-α分泌量的抑制率分别为28.6%、65.4%、89.3%。
8TG对小鼠RAW264.7细胞IL-6分泌的影响
TG组呈剂量依赖关系抑制IL-6分泌,在高剂量组中下降极显着(P<0.01),在中、低剂量组中下降显着(P<0.05)。其中,在250、500、1 000 μg/mL的TG处理时,与LPS组相比,对IL-6分泌量的抑制率分别为32.3%、54.1%、85.7%。
讨 论
抑制NF-κB通路是抗炎药物的重要靶点。可以通过研究TG影响IκB的磷酸化来确定其是否抑制NF-κB信号通路的活化,从而减少炎症因子等的生成。Western blot的结果表明TG明显抑制了IκB的磷酸化,且随着TG质量浓度的增加呈剂量依赖性,间接证明TG能通过抑制NF-κB信号转导通路的活化而起到了抗炎的作用。
结 论
TG能显着抑制RAW264.7细胞的NO、TNF-α和IL-6分泌和iNOS、TNF-α、IL-6的mRNA表达,且成剂量依赖关系;此外,TG的质量浓度与IκB-α蛋白磷酸化水平的抑制率呈正比关系。蒲公英糖蛋白对NF-κB信号途径有一定的调控作用,并且有显着的体外抗炎效果。