来自集美大学食品与生物工程学院和水产学院的王姣、魏好程、何传波等人同时研究鲍内脏多糖在体外和细胞水平的抗氧化作用,建立LO2细胞的H2O2损伤模型,选取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、?OH清除率、乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量指标,充分探究和验证不同化学组成的鲍内脏多糖的抗氧化活性差异,为开发抗氧化功能产品提供理论依据。
1、鲍内脏多糖纯化组分性质分析
CAVP纯化后得到两种多糖组分AVP1、AVP2,AVP1的总糖含量和硫酸根含量高于AVP2;两种多糖均含有少量蛋白质。AVP1的分子质量小于AVP2。
2、鲍内脏多糖的DPPH自由基清除能力
3种多糖样品对自由基的清除能力较为接近,CAVP的DPPH自由基的清除率高于AVP1和AVP2,而AVP2又高于AVP1。
3、鲍内脏多糖的?OH清除能力
鲍内脏多糖均具有较好的?OH清除活性,CAVP对?OH的清除能力随质量浓度的增加近乎呈近线性增加,最终清除率可达约80%。而两种纯化鲍内脏多糖AVP1和AVP2的?OH清除率均只能达到60%左右,之后增长缓慢呈近持平状态,但是在低质量浓度条件下AVP2与CAVP、AVP1对比抗氧化性能较强。以IC50值来分析样品对?OH的清除能力,CAVP和AVP2要好于AVP1。
4、鲍内脏多糖对H2O2引起LO2细胞损伤的保护作用
鲍内脏多糖对H2O2损伤LO2细胞的保护作用
CAVP、AVP1和AVP2均在加样量0.5 mg/mL时较模型组开始差异显着性(P<0.05,P<0.01),当质量浓度为4 mg/mL时,保护细胞存活率较所选其他质量浓度相比最高,且与损伤模型组相比差异极显着(P<0.05)。
鲍内脏多糖对细胞上清中LDH活力的影响
LO2细胞经H2O2损伤后细胞培养液中LDH活力显着升高,经VC和鲍内脏多糖保护的LO2细胞培养液中LDH的含量明显少于损伤模型组。3 种样品组间差异不明显,表明实验组细胞损伤程度相对较低,鲍内脏多糖具有抑制细胞损伤的能力。
鲍内脏多糖对细胞内GSH-Px、CAT、SOD活力的影响
CAVP、AVP1在质量浓度达到4 mg/mL条件下才能极显着提高受损细胞内GSH-Px的活力(P<0.01)。AVP2对提高GSH-Px活力作用效果不显着(P>0.05)。
CAVP、AVP2在质量浓度0.5 mg/mL条件下极显着提高受损细胞内CAT活性(P<0.01),AVP1对CAT活力的提高作用较弱。而VC阳性对照组对提高提高细胞内CAT活力作用均优于鲍内脏多糖样品。
CAVP对提高受损细胞内SOD活性作用较强,其次为VC阳性对照组,经它们作用后的细胞中SOD活性与模型组相比均呈极显着增加(P<0.01)。样品AVP1、AVP2也有相应提高SOD活力的能力,表明鲍内脏多糖能提高受损细胞中SOD活力,能防止其受损后快速氧化,具有一定的保护能力。
鲍内脏多糖对MDA含量的影响
鲍内脏多糖对受损细胞过氧化具有保护性能,可降低受损细胞内MDA的产生,在质量浓度为4 mg/mL时,样品CAVP、AVP1和AVP2对降低脂质过氧化产物MDA的生成具有显着作用(P<0.05,P<0.01)。
讨论与结论
3 种鲍内脏多糖在细胞水平上均有抗氧化活性,表现为CAVP在提高细胞存活率的作用中效果较纯化多糖好,但是两种纯化多糖对于保护细胞膜避免LDH的释放作用较优,而3 种样品在对提高细胞内抗氧化酶活力上均起不同作用。
鲍内脏多糖具有一定的抗氧化能力,可有效清除DPPH自由基和?OH,且在一定质量浓度范围内提高细胞存活率、改善抗氧化酶的活力、减少过氧化产物生成、对经H2O2损伤的LO2细胞具有保护作用。