河北工程大学生命科学与食品工程学院的赵丽云、刘爱莲、刘美玉*等人通过建立HepG2细胞氧化应激体外模型，比较LA和白藜芦醇（RES）在对乙酰氨基酚（APAP）致HepG2细胞损伤中的抗氧化作用，并初步探讨其抗氧化机制，为APAP所致肝损伤防治和功能食品开发提供理论依据。
1、APAP诱导HepG2细胞肝损伤模型的建立
随着APAP浓度增加，HepG2细胞的存活率逐渐降低，APAP的IC50为60 μmol/L，选择该浓度造模进行后续研究。
2、LA和RES对APAP诱导HepG2细胞损伤的影响
首先测定了LA和RES对HepG2细胞的毒性影响，发现LA对细胞无影响的安全浓度为0～60 μmol/L；RES对细胞无影响的安全浓度为0～90 μmol/L。用20、60 μmol/L的LA和RES分别对模型组细胞处理24 h后，结果显示LA和RES均能提高细胞活力，且LA组细胞活力较RES组高，尤以20 μmol/L LA组效果最佳。
3、Annexin-V FITC/PI双标记法检测细胞凋亡
每个图中左上Q1-UL代表坏死细胞，右上Q1-UR代表凋亡晚期细胞，左下Q1-LL代表正常细胞，右下Q1-LR代表早期凋亡细胞。
以PBS为对照，其凋亡率为12.48%（Q1-UR+Q1-LR）；模型组的细胞凋亡率为99.14%，与对照组相比细胞凋亡率明显升高；RES组的细胞凋亡率为27.64%，LA组的细胞凋亡率为21.69%，二者与模型组比较细胞凋亡率均明显降低。LA组凋亡率降低值明显低于RES组凋亡率降低值。由此可见，RES和LA均可抑制氧化应激引起的细胞凋亡，且LA的效果优于RES。
4、LA和RES的细胞抗氧化活性比较
不同浓度的LA和RES作为抗氧化剂抑制了该反应的进行，荧光强度减小；且相同浓度下，LA组比RES组荧光强度小，说明LA抑制DCF的生成的能力比RES强。
5、LA和RES对APAP诱导的HepG2细胞中MDA、GSH及SOD水平的影响
与对照组相比，模型组MDA含量高度显着升高，而GSH质量浓度和SOD活力高度显着降低；与模型组相比，LA组和RES组均可高度显着降低MDA含量，同时高度显着提高GSH质量浓度和SOD活力，而LA比RES效果好。
6、LA和RES对凋亡相关基因Bcl-2、Bax和caspase-3表达的影响
qPCR检测凋亡相关基因表达结果表明，与对照组相比，模型组Bax和caspase-3表达量高度显着提高，同时Bcl-2表达量高度显着降低；与模型组相比，LA组和RES组Bax和caspase-3表达量均有降低，同时Bcl-2表达量均有提高，但LA组比RES组效果更显着，表明LA比RES具有更好的抑制HepG2细胞凋亡的作用；Western blot结果也发现有同样的趋势，首先LA和RES可以从蛋白水平调节APAP诱导的损伤，其次LA比RES能更有效缓解APAP诱导的损伤。
结 论
综上所述，LA比RES对APAP引起的肝损伤起到保护作用明显，并且初步探讨出LA和RES对APAP引起肝损伤保护作用机制，是通过抑制氧化应激和细胞凋亡（通过降低MDA含量，提高GSH和SOD活力，下调Bax和caspase-3表达量及上调Bcl-2表达量）来实现其对APAP诱导的HepG2细胞损伤的保护作用。并且LA比RES干预APAP引起的细胞损伤效果更好。因此LA和RES对APAP引起肝损伤保护作用及其机制有待于更多基础和临床实验的证实。
