为了系统准确地评价小米糠的抗氧化生物活性及其作用机制，东北农业大学食品学院的郭增旺、王中江*、江连洲*等人采用H2O2诱导HepG2细胞构建细胞氧化应激损伤模型，采用CCK-8检测细胞存活率，流式细胞仪检测胞内ROS水平，酶联免疫吸附测定法检测胞内抗氧化酶系活性，Western blotting法检测细胞凋亡通路蛋白表达量，以此评价小米糠黄酮（FMB）的抗氧化活性并探索其作用机理，从而为小米糠的功能性食品开发和抗氧化药物的研究提供理论依据。
1、FMB对H2O2诱导HepG2细胞存活率的影响
正常对照组：不加FMB和H2O2干预处理，只加入等量的PBS溶液；氧化应激模型组：不加FMB干预，加入等量的PBS溶液培养24 h后，加入终浓度为2 mmol/L H2O2溶液刺激1 h；实验组：FMB低、中、高剂量组（FMB-L、FMB-M、FMB-H，终质量浓度分别为50、100、150 μg/mL）干预24 h后，加入终浓度为2 mmol/L H2O2溶液刺激1 h。
与正常组相比，H2O2构建的氧化应激模型组的细胞存活率显着下降（P＜0.05），这表明氧化应激模型构建成功；与模型组相比，FMB中、高剂量组能显着提升细胞存活率（P＜0.05），且呈现量效关系。这表明FMB对HepG2具有一定程度的保护作用，能缓解H2O2对HepG2的氧化应激损伤。
2、FMB对H2O2诱导HepG2胞内ROS含量的影响
与正常组相比，H2O2构建的氧化应激模型组的胞内ROS水平显着上升（P＜0.05）；与模型组相比，FMB-L、FMB-M、FMB-H组均能显着提升细胞存活率（P＜0.05），且呈现剂量依赖性关系。这表明FMB能显着缓解H2O2所引起HepG2胞内ROS水平的升高，抑制ROS对细胞膜和胞内物质的氧化损伤，进而发挥抗氧化应激功能。
3、FMB对H2O2诱导HepG2的MDA水平的影响
与正常组相比，H2O2构建的氧化应激模型组的胞内MDA浓度显着上升（P＜0.05）；与模型组相比，FMB-L、FMB-M、FMB-H组能显着降低胞内MDA浓度（P＜0.05），且呈现剂量依赖性关系。这表明HepG2细胞经H2O2诱导后细胞膜发生严重损伤，而FMB能显着缓解活性氧对细胞膜脂质氧化损伤的影响，能减轻自由基对机体的氧化应激损伤。
4、FMB对H2O2诱导HepG2抗氧化物酶系活力的影响
与正常组相比，H2O2构建的氧化应激模型组的抗氧化物酶系活力显着降低（P＜0.05）；与模型组相比，FMB-L组的CAT活力显着升高，FMB-M和FMB-H组的SOD、CAT、GSH-Px活力显着升高。这表明该浓度下的H2O2能破坏细胞的氧化调节系统，降低胞内抗氧化酶系的活力，致使胞内的氧化动态平衡失衡和胞内MDA水平上升，导致细胞发生不可逆的氧化损伤；同时也表明氧化应激模型构建成功；而FMB预培养后能缓解H2O2造成的胞内抗氧化物酶系活力降低并且降低胞内MDA水平，对氧化应激损伤有保护作用，能提高机体对外界氧化应激的调控能力。
5、FMB对H2O2诱导HepG2的凋亡信号通路影响
与正常组相比，H2O2构建的氧化应激模型组的bax、p53和Caspase-3蛋白的表达量均显着上升（P＜0.05）；与模型组相比，FMB-L组的p53和Caspase-3蛋白表达量显着下降（P＜0.05），FMB-M和FMB-H组的bax、p53和Caspase-3蛋白显着下降（P＜0.05）。结合前面实验结果可知，该浓度下的H2O2能使细胞存活率降低，并且使胞内凋亡蛋白bax、p53和Caspase-3表达量显着升高。bax凋亡蛋白的水平上升表示细胞的线粒体凋亡通路被激活，线粒体遭受到氧化应激损伤；p53凋亡蛋白的表达量上升代表DNA发生损伤后，细胞进行自我基因修复，当损伤不可修复时则激活Caspase-3凋亡蛋白的表达，而Caspase-3蛋白是细胞发生凋亡的最终执行者。这表明H2O2能激活细胞线粒体凋亡通路和Caspase-3凋亡通路，进而导致细胞存活率下降。
结 论
结果表明：FMB能显着缓解H2O2引起的HepG2细胞存活率的降低和胞内ROS、MDA水平的升高，恢复抗氧化酶系酶活力和下调bax、p53和Caspase-3凋亡蛋白的表达量。这表明FMB能通过抑制细胞凋亡通路蛋白的表达，调控细胞的氧化还原系统、清除胞内活性氧、提高胞内抗氧化酶系的活性，缓解氧化应激对机体所造成的损伤，增强机体对外界氧化应激的调控能力。
