西南大学食品科学学院,重庆市农产品加工及贮藏重点实验室,食品科学与工程国家级实验教学示范中心的龙 霞、宁俊丽、丁晓雯*等人通过测定鸭油的1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、铁还原能力(FRAP)、氧自由基吸收能力(ORAC),评价鸭油在体外是否具有抗氧化活性;通过测定鸭油对β-胡萝卜素褪色的抑制率、对蛋白质的影响、对DNA的保护潜力,评价鸭油在体外对生物大分子抗氧化能力的影响,为鸭油的深入开发利用提供依据。
1、鸭油对DPPH自由基的清除作用
不同质量浓度纯鸭油:用无水乙醇将精炼鸭油(提取过程中不加抗氧化剂)分别配制为质量浓度5、10、15、20、25、30、35 mg/mL的溶液。
不同质量浓度鸭油+叔丁基对苯二酚(TBHQ):用无水乙醇将精炼鸭油(提取过程中加0.015%的TBHQ作抗氧化剂)分别配制为质量浓度5、10、15、20、25、30、35 mg/mL的溶液。
不同质量浓度TBHQ:用无水乙醇将TBHQ分别配制为与鸭油中所含质量浓度相同的溶液,即0.75、1.5、2.25、3、3.75、4.5、5.25 μg/mL。
纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ对DPPH自由基都具有清除作用,且随着质量浓度的增加,它们对DPPH自由基清除率也在增加。鸭油+TBHQ组对DPPH自由基的清除率高于同质量浓度纯鸭油、同质量浓度TBHQ的清除率,且差异均显着(P<0.05)。加有TBHQ的鸭油质量浓度为35 mg/mL时,对DPPH自由基的清除率可达(78.81±2.96)%;其中所含TBHQ对DPPH自由基的清除率为(47.27±2.76)%。纯鸭油质量浓度为35 mg/mL时,对DPPH自由基的清除率为(23.19±4.18)%。
2、鸭油的铁还原能力
纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ都有一定的FRAP,且随着质量浓度的增加,其FRAP也在增加。不同质量浓度鸭油+TBHQ的FRAP显着高于同质量浓度纯鸭油和TBHQ的FRAP,纯鸭油质量浓度为35 mg/mL时,其FRAP为(219.87±3.06)μmol/L,而同质量浓度鸭油所含TBHQ的FRAP为(169.53±4.04)μmol/L,鸭油+TBHQ的FRAP为(241.87±3.06)μmol/L,表明TBHQ对鸭油的铁还原能力有一定的促进作用。
3、鸭油的抗氧化能力指数
随着纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ质量浓度的增加,它们的Net AUC也在增加,鸭油+TBHQ组、纯鸭油组的Net AUC显着高于TBHQ组,表明鸭油能显着延缓FL荧光的衰退。纯鸭油、鸭油+TBHQ的质量浓度在5~25 mg/mL时,鸭油+TBHQ组的Net AUC显着高于纯鸭油;在30~35 mg/mL时,Net AUC虽低于鸭油组,但差异不显着,表明TBHQ可能会增强鸭油对FL荧光的保护作用。
纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ均具有一定的ORAC,随着其质量浓度的升高,ORAC也在增加。用SPSS软件进行相关性分析发现,(P<0.05)浓度与ORAC的r>0.800,P<0.05,表明它们的抗氧化能力与浓度存在显着正相关。纯鸭油质量浓度在5~25 mg/mL的范围内,其各质量浓度的ORAC差异不显着,质量浓度增加至35 mg/mL时,差异显着。
4、鸭油对β-胡萝卜素褪色的抑制作用
纯鸭油、TBHQ、鸭油+TBHQ对β-胡萝卜素褪色均有明显的抑制作用,且随着质量浓度的增加,它们的抑制作用增强。TBHQ对β-胡萝卜素褪色的抑制作用均显着低于纯鸭油和鸭油+TBHQ的。加有TBHQ的鸭油质量浓度为35 mg/mL时,对β-胡萝卜素褪色的抑制率可达(67.29±3.37)%,纯鸭油的抑制率为(55.47±1.76)%,TBHQ的抑制率仅为(39.61±0.76)%。
5、鸭油抗蛋白质氧化损伤能力
纯鸭油、鸭油+TBHQ的蛋白羰基生成抑制率随着其剂量的增加而降低,即随着它们剂量的增加蛋白质生成的羰基越多,表明鸭油、鸭油+TBHQ可能会促进BSA氧化。当鸭油+TBHQ剂量为6 mL/g时,会导致BSA羰基含量增加(50.00±3.21)%;纯鸭油剂量为6 mL/g蛋白时,会导致BSA羰基含量增加(50.71±1.57)%。TBHQ组的蛋白质羰基生成抑制率随着其剂量的增加而增强,蛋白质羰基含量减少,表明TBHQ浓度越高,对BSA的保护作用越强。鸭油+TBHQ剂量为1~3 mL/g时,其蛋白羰基生成抑制率显着高于同剂量纯鸭油的,可能是TBHQ在一定程度上会抑制鸭油对BSA的损伤。纯鸭油剂量在1~4 mL/g范围内,可以抵抗BSA的氧化应激,随着剂量的增加,其抵制作用显着下降,当剂量在5~6 mL/g时,促进BSA氧化;鸭油+TBHQ剂量在1~5 mL/g范围内,可以抵制BSA的氧化应激,随着剂量的增加,其抵制作用显着降低,当剂量在6 mL/g时,促进BSA氧化;不同剂量的TBHQ对BSA的保护作用显着升高,提示TBHQ可能会降低鸭油对BSA的氧化。
结 论
本实验通过测定不同质量浓度鸭油的DPPH自由基清除能力,铁还原能力、抗氧化能力指数、抑制β-胡萝卜素褪色能力、对DNA的保护潜力,对蛋白质羰基的影响,研究了鸭油的体外抗氧化能力,结果表明,鸭油具有一定的体外抗氧化活性,能抵制生物大分子脂质、DNA的氧化应激,且在一定质量浓度范围内,质量浓度越高,抗氧化性越好。