华南农业大学食品学院的李 焱、黄 苇*和华南农业大学工程学院的卢明剑等人用紫果西番莲种籽黄酮灌胃D-半乳糖氧化损伤模型小鼠，测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活力及丙二醛（MDA）、蛋白质羰基含量等多种生化指标，评价西番莲种籽黄酮作为外源性抗氧化剂的体内抗氧化活性，并采用液相色谱-电喷雾四极杆飞行时间质谱（LC-ESI-Q-TOF-MS）技术对其成分构成进行分析，推测出可能的裂解途径，以期为紫果西番莲种籽的深入开发提供理论依据。
1、种籽黄酮体内抗氧化活性的评价结果
以中、高剂量种籽黄酮灌胃小鼠后，除了中剂量组小鼠的肝组织CAT活力和肾组织T-SOD活力以外，其余中、高剂量组小鼠肝、肾组织的T-SOD、CAT、GSH-Px活力均显着高于模型组（P＜0.05）。与模型组相比，中剂量种籽黄酮使小鼠肝组织的T-SOD活力提高了50.51%、CAT活力提高18.01%、GSH-Px活力提高29.62%，高剂量种籽黄酮使小鼠肝组织的这3 种抗氧化酶活力分别提高了69.40%、38.57%、46.38%；中剂量种籽黄酮使小鼠肾组织的T-SOD活力提高了0.01 倍、CAT活力提高了0.90 倍、GSH-Px活力提高了0.77 倍，高剂量种籽黄酮使小鼠肾组织的这3 种抗氧化酶活力分别提高了0.36、1.39、1.41 倍。以上结果表明，肝、肾组织的T-SOD、CAT、GSH-Px活力与种籽黄酮的灌胃剂量存在明显的剂量-效应关系，种籽黄酮剂量越大，3 种抗氧化酶活力越高。
中、高剂量种籽黄酮灌胃小鼠后，小鼠肝、肾组织的MDA、蛋白质羰基含量均显着低于模型组（P＜0.05）。与模型组相比，中剂量种籽黄酮使小鼠肝组织的MDA含量降低了23.75%、蛋白质羰基含量降低了56.02%，高剂量种籽黄酮使小鼠肝组织的MDA含量降低了47.49%；中剂量种籽黄酮使小鼠肾组织的MDA含量降低了75.89%、蛋白质羰基含量降低了58.51%，高剂量种籽黄酮使小鼠肾组织的MDA、蛋白质羰基含量分别降低了78.72%、80.50%。以上结果表明，肝、肾组织的MDA、蛋白质羰基含量与种籽黄酮的灌胃剂量存在剂量-效应关系，黄酮剂量越大，MDA、蛋白质羰基含量越低。
与VC组相比，种籽黄酮中剂量组小鼠肝组织的CAT、GSH-Px活力均无显着差异（P＞0.05），蛋白质羰基含量显着降低（P＜0.05），种籽黄酮高剂量组小鼠肝组织的MDA含量无显着差异（P＞0.05）；种籽黄酮中剂量组小鼠肾组织的CAT活力、GSH-Px活力、蛋白质羰基含量均无显着差异（P＞0.05），MDA含量显着降低（P＜0.05）。这表明种籽黄酮具有较好的体内抗氧化能力。
2、种籽黄酮成分分析结果
化合物1：对质荷比为m/z 357的准分子离子进行单离子提取，在保留时间为17.351 min检出目标离子。一级质谱中给出m/z 357为[M＋H]＋，二级质谱给出m/z 219、165、137，结合文献推测其裂解途径，m/z 219为黄酮母核γ-吡喃酮环裂解发生RDA（Retro-Didls-Alder）重排产生的奇电子碎片离子；m/z 165是m/z 219奇电子碎片离子上异戊基的苄基键断裂产生的?鎓离子，同时丢失了一分子异丁烷基；m/z 137是m/z 165丢失一分子CO产生的奇电子碎片离子。
化合物2：对质荷比为m/z 381的准分子离子进行单离子提取，在保留时间为15.280 min检出目标离子。一级质谱中给出m/z 381为[M＋H]＋，二级质谱给出m/z 349、215、161，结合文献推测其裂解途径，m/z 349为[M－CH3OH＋H]＋，由γ-吡喃酮环与甲氧基之间发生i键断裂产生；质荷比m/z 349的γ-吡喃酮环裂解发生RDA重排反应且芳香醚发生C—O键断裂，丢失—CH3产生m/z 215；m/z 161由m/z 215丢失两分子—CO产生。
化合物3：对质荷比为m/z 399的准分子离子进行单离子提取，在保留时间为12.234 min检出目标离子。一级质谱给出m/z 399为[M＋H]＋，二级质谱给出m/z 368、202、134，推测其裂解途径，m/z 368为[M－CH3OH＋H]＋，由γ-吡喃酮环与甲氧基之间发生i断裂产生；m/z 368的γ-吡喃酮环发生RDA重排反应且失去一分子水产生m/z 202；m/z 134由m/z 202发生芳香醚氢重排反应，同时丢失一分子3-甲基-1,2-丁二烯产生。
化合物4：对质荷比为m/z 461的准分子离子进行单离子提取，在保留时间为14.892 min检出目标离子。一级质谱给出m/z 461为[M＋H]＋，二级质谱给出m/z 325、269、163。推测其裂解途径，m/z 325为[M－136＋H]＋，由黄酮母核B环芳香醚C—O键断裂和A环芳香醚C—O键断裂产生；m/z 269由m/z 325丢失两分子的—CO产生；m/z 163为黄酮母核γ-吡喃酮环发生RDA重排反应产生的奇电子碎片离子。
讨论
本研究中的4 种黄酮物质均发生了RDA裂解，并列出了其各自的特征碎片离子，本研究结果丰富了紫果西番莲全草的黄酮类别。LC-ESI-Q-TOF-MS技术提供多级高分辨质谱数据，在化合物结构鉴定中应用广泛，但该技术难以区分化合物的同分异构体，因此化合物结构的确定还需要深入研究。
