南昌大学 食品科学与技术国家重点实验室的丁晓萌、侯坤友、余 强* 等人利用Caco-2细胞分别建立肠道葡萄糖吸收和转运模型，研究绿色木霉发酵法制备脱脂米糠可溶性膳食纤维（DRB-SDF）对小肠葡萄糖吸收和转运的影响，及其对吸收和转运过程中主要载体和相关酶类mRNA表达的影响，从分子水平初步探究DRB-SDF降低餐后血糖的作用机制，为降糖功能食品的开发提供理论依据。
1、细胞活力测定结果
DRB-SDF在质量浓度为1～16 mg/mL时，对Caco-2细胞并未产生毒性作用。相反，随着DRB-SDF质量浓度的增加，细胞活力略微上升，当质量浓度为16 mg/mL时，相比于正常组细胞活力有显着上升（P＜0.05）。故选用质量浓度为2、4、8 mg/mL的DRB-SDF进行进一步研究。
2、DRB-SDF对Caco-2细胞葡萄糖吸收的影响
Caco-2细胞内葡萄糖浓度随着时间延长而增加，而DRB-SDF能在一定程度上抑制Caco-2细胞对葡萄糖的吸收。在加入DRB-SDF 30、60、120 min后，相比于正常组，Caco-2细胞内葡萄糖浓度均降低且具有浓度依赖性。DRB-SDF作用30 min后，高剂量组（8 mg/mL）与正常组相比葡萄糖吸收有显着下降（P＜0.05）；DRB-SDF作用60 min后，低剂量组（2 mg/mL）葡萄糖吸收量略有降低，中、高（4、8 mg/mL）剂量组分别显着（P＜0.05）和极显着（P＜0.01）下降，并且作用效果比阳性组更明显；DRB-SDF作用120 min后，与正常组相比，低剂量组Caco-2细胞内部葡萄糖浓度显着降低（P＜0.05），当DRB-SDF质量浓度为4 mg/mL和8 mg/mL时有极显着下降（P＜0.01）。
3、DRB-SDF对Caco-2细胞葡萄糖转运的影响
DRB-SDF对葡萄糖在Caco-2细胞的跨膜转运有一定的抑制作用。DRB-SDF作用30 min后，相比于正常组，实验组的葡萄糖跨膜转运均被抑制，且呈浓度依赖性，中、高剂量组分别有显着性（P＜0.05）和极显着（P＜0.01）差异；DRB-SDF作用60 min后，与正常组相比，实验组葡萄糖跨膜转运均有极显着下降（P＜0.01）；DRB-SDF作用120 min后，DRB-SDF对葡萄糖跨膜转运略有抑制，当DRB-SDF质量浓度为8 mg/mL时，葡萄糖跨膜转运相比于正常组显着降低（P＜0.05）。
4、DRB-SDF对Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶活性的影响
DRB-SDF可以浓度依赖性地抑制Caco-2细胞内α-葡萄糖苷酶活力，中、高剂量组酶活力相较于正常组分别被显着（P＜0.05）和极显着（P＜0.01）抑制。相比于正常组，DRB-SDF可下调Caco-2细胞α-葡萄糖苷酶mRNA的相对表达量，且这种抑制作用呈浓度依赖性，中、高剂量组均有显着性下降（P＜0.05）。当DRB-SDF质量浓度为8 mg/mL时，其对于Caco-2细胞内α-葡萄糖苷酶活力及其mRNA相对表达量的抑制作用甚至优于阿卡波糖组。
5、DRB-SDF对Caco-2细胞转运酶系SGLT-1、GLUT-2 mRNA表达的影响
不同质量浓度DRB-SDF作用后，Caco-2细胞内SGLT-1、GLUT-2 mRNA相对表达水平被明显下调。随着DRB-SDF质量浓度的增加，SGLT-1、GLUT-2 mRNA相对表达量也逐渐降低。相较于正常组，低剂量组SGLT-1、GLUT-2 mRNA相对表达量略有降低，但不显着，中、高剂量组均表现出统计学显着性（P＜0.05）或极显着性（P＜0.01）差异。
6、DRB-SDF对Caco-2细胞Na＋-K＋-ATP酶mRNA表达的影响
DRB-SDF可以显着抑制Caco-2细胞内Na＋-K＋-ATP酶mRNA相对表达水平（P＜0.05），并具有浓度依赖性。当DRB-SDF质量浓度为4、8 mg/mL时，Caco-2细胞内Na＋-K＋-ATP酶mRNA相对表达量比阿卡波糖组更低。
讨 论
绿色木霉发酵法制备的脱脂米糠可溶性膳食纤维可能通过抑制α-葡萄糖苷酶的活性，延缓碳水化合物降解成葡萄糖；同时DRB-SDF可抑制小肠上皮细胞葡萄糖转运蛋白SGLT-1、GLUT-2和Na＋-K＋-ATP酶的活性、占据葡萄糖的吸收位点，延缓肠道葡萄糖的吸收和跨膜转运，最终达到降低餐后血糖水平的目的。本实验结果可为进一步研究膳食纤维降血糖机制及降糖功能食品的开发提供理论依据。
