北京食品营养与人类健康高精尖创新中心,中国农业大学食品科学与营养工程学院的姜天依、孙 璐、车会莲*等人通过建立小鼠被动皮肤过敏(PCA)和过敏性皮炎模型来确定甘草酸(GA)的抗过敏功效,并在分析GA是否具有降低胞内钙离子水平作用的基础上,探究钙离子通道蛋白的表达水平在GA处理前后的差异,确定GA是否通过影响钙离子通道蛋白的表达来影响钙离子水平。以期为深入探究GA的抗过敏机理及治疗过敏反应开拓新的方法。
1、GA对PCA小鼠耳部毛细血管通透性的影响
色甘酸钠组和不同剂量GA组的吸光度都极显着低于阴性对照组(P<0.01),而100 mg/kg mb GA组显着低于色甘酸钠和1 mg/kg mb和10 mg/kg mb GA组。结果说明GA能够降低致敏模型小鼠耳部毛细血管通透性。
2、GA对PCA小鼠血清组胺质量浓度的影响
色甘酸钠和GA各剂量组PCA小鼠的组胺水平都极显着低于阴性对照组(P<0.01),且对组胺质量浓度的降低效果与GA剂量有正相关性。在1~100 mg/kg mb范围内,GA剂量与抑制肥大细胞脱颗粒的作用呈现正相关性。
3、GA对DIAD小鼠耳肿胀度的影响
过敏原激活肥大细胞后会产生许多细胞因子,比如TNF-α,在过敏模型中,TNF-α水平越高表明过敏反应越剧烈。对小鼠血清中TNF-α质量浓度的检测结果显示,GA处理能够降低DIAD小鼠血清中TNF-α质量浓度。10 mg/kg或更高剂量GA处理组的TNF-α质量浓度极显着低于DNFB组(P<0.01)。表明GA能够降低过敏性皮炎小鼠血清的TNF-α质量浓度。
4、GA对肥大细胞脱颗粒的抑制作用
肥大细胞脱颗粒能引发机体产生过敏症状,HEX释放率是反映细胞脱颗粒水平的生物指标。实验结果显示,GA处理能显着抑制RBL-2H3细胞的HEX释放。500、1 000 μg/mL的GA处理使HEX的释放率分别下降37.9%和54.8%,说明GA能抑制肥大细胞脱颗粒。
5、GA处理对胞内钙离子水平的影响
用钙离子荧光探针Fluo-3 AM分析IgE致敏的RBL-2H3细胞内钙离子浓度的变化。结果显示,GA能够抑制抗原诱导的胞内Ca2+浓度上升。500 μg/mL和1 000 μg/mLGA处理显着降低了细胞内Ca2+浓度。说明GA可能通过调节细胞内Ca2+浓度影响细胞的脱颗粒反应。
6、GA处理对钙离子通道蛋白表达水平的影响
500 μg/mL和1 000 μg/mL的GA处理显着降低了细胞内STIM1和TRPC1蛋白的表达水平(P<0.05)。这证明GA可能通过调控钙离子通道蛋白的表达来影响胞内钙离子浓度,从而抑制细胞的脱颗粒及介质的释放。在1 000 μg/mLGA处理的细胞中,TRPC1表达水平甚至低于未给予抗原刺激的阴性对照组,这进一步表明GA对TRPC1表达有显着的抑制作用。
讨 论
GA对钙离子的调控作用也可能直接或间接地抑制小鼠血清中组胺水平升高、血管通透性增大和血清中TNF-α水平增加等过敏反应,这还需要展开更加深入的研究。