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使用免疫磁性分离和PMAxx-qPCR技术改进了VBNC副溶血性弧菌定量检测

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-11-15
核心提示:免疫磁性分离(IMS)是一种从复杂食品样品中特异性富集和纯化目标食源性致病菌的有效方法。
   免疫磁性分离(IMS)是一种从复杂食品样品中特异性富集和纯化目标食源性致病菌的有效方法。
 
  为了更准确、更灵敏地检测活的但不可培养的(VBNC)副溶血性弧菌(V. parahaemolyticus),华南农业大学食品学院、广东省营养与功能食品重点实验室的Lichao Zhao、Xinrui Lv、Xiao Cao等人在IMS-PMAxx实时(定量)聚合酶链反应(IMS-PMAxx-qPCR)检测中使用改良的单叠氮化丙锭(PMAxx)染料以消除死细胞干扰。利用链霉亲和素偶联的磁性纳米颗粒和生物素化多克隆抗体制备了免疫磁珠(IMBs),并优化了反应条件,建立了VBNC副溶血性弧菌IMS检测方法。研究者确定了最佳抗体质量(30 μg)、IMBs体积(150 μL)、孵育时间(45 min),免疫磁性分离时间(4 min)和分离温度(25 ℃)。IMS-PMAxx-qPCR法在未经预富集的情况下,可在低至1.85?CFU/g的水平上检测生虾样品中的VBNC副溶血性弧菌。
 
  IMS-PMAxx-qPCR检测方法具有灵敏度高、选择性好、操作简便、快速(<4 h)等优点,并且优于传统的基于PCR的分析。因此,该方法有可能改良生虾中VBNC副溶血性弧菌的快速检测。
 
 
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