南京财经大学食品科学与工程学院，江苏省现代粮食流通与安全协同创新中心，江苏高校粮油质量安全控制及深加工重点实验室的吴怡亮、胡秋辉*和南京农业大学食品科技学院的仲 磊等人基于RAW264.7细胞，以脂多糖（LPS）为阳性对照，SPI、PEP和大豆分离蛋白-杏鲍菇多糖混合物（PP）为样品对照，研究W-PP对巨噬细胞的活力、中性红吞噬活性、NO释放量、细胞因子分泌及其mRNA表达的影响，进而评价这种共价结合物的免疫调节活性，以期为后续进一步的深入研究提供参考。
1、W-PP对RAW264.7细胞活力的影响
当质量浓度为2～50?μg/mL时，SPI、PEP、PP和W-PP 4 种样品对细胞活力均无显着影响（P＞0.05），表明4 种样品质量浓度在2～50?μg/mL时对细胞没有毒性。SPI、PEP、PP质量浓度为100～400?μg/mL，W-PP质量浓度为200～400?μg / m L时，细胞活力呈显着降低的趋势（P＜0.05），表明过高质量浓度的样品对细胞毒性较大，从而降低其活力。因此，综合细胞活力实验结果，选择25、50?μg/mL和100?μg/mL这3 个质量浓度梯度对细胞进行后续实验处理，并在此质量浓度下，评价W-PP对RAW264.7细胞的免疫调节作用。
2、W-PP对RAW264.7细胞中性红吞噬活性的影响
LPS组作为阳性对照，经LPS刺激后，RAW264.7细胞中性红吞噬能力显着加强（P＜0.05）。随着质量浓度的上升，SPI对RAW264.7细胞的中性红吞噬能力无显着影响，PEP、PP的中性红吞噬活性在质量浓度为50、100?μg/mL时分别达到最大值。而W-PP对细胞中性红吞噬活性呈显着促进作用（P＜0.05），在100 μg/mL质量浓度时中性红吞噬活性达到空白对照组的2.05 倍，说明糖基化SPI可以增强巨噬细胞对外来物质的吞噬作用，从而保护机体免受病原体侵蚀，提高机体免疫力。
3、W-PP对RAW264.7细胞NO浓度的影响
与空白对照组相比，RAW264.7细胞经LPS刺激后NO分泌量显着增加（P＜0.05）。与空白对照组相比，SPI和PEP处理后细胞NO释放量无显着差异（P＞0.05）。而当PP、W-PP在质量浓度为50?μg/mL和100?μg/mL时，NO释放量随着质量浓度的升高而上升，并且都在100?μg/mL时达到最大值，说明PP、W-PP样品在一定质量浓度下可激活并提高巨噬细胞RAW264.7分泌NO的能力。
4、W-PP对RAW264.7细胞TNF-α、IL-1β和IL-6质量浓度及其mRNA表达水平的影响
与空白对照组相比，LPS组的TNF-α、IL-1β和IL-6质量浓度显着上升。与空白对照组相比，SPI和PP对细胞因子分泌量没有显着影响（P＞0.05），而PEP在较高质量浓度下对TNF-α（＞50?μg/mL）和IL-1β、IL-6（＞100?μg/mL）的质量浓度具有显着促进作用。PEP组的TNF-α、IL-1β和IL-6质量浓度较PP组更高，说明在高质量浓度下PEP对细胞因子的分泌有促进作用。
结 论
本实验研究了W-PP对RAW264.7细胞活力、中性红吞噬活性、NO释放量、细胞因子分泌及其mRNA表达水平的影响。结果表明，W-PP在25～100?μg/mL范围变化时，能显着增强RAW264.7细胞中性红吞噬能力、NO释放量和细胞因子（IL-1β、IL-6和TNF-α）质量浓度。此外，PEP和W-PP能显着提高这3 种细胞因子的mRNA水平，其中100?μg/mL?W-PP对细胞因子mRNA水平的上调作用最强。由此可得，W-PP具有较强的免疫调节作用，说明糖基化反应可以增强SPI的生物活性。
