为开发甜度更高和更适合人体生理需求的二肽类甜味剂，同时丰富二肽甜味剂的结构类型。暨南大学理工学院的胡南、邱云、晏日安*等人设计了一条新的合成路线，采用叔丁基保护半胱氨酸的巯基以及甲基保护半胱氨酸的羧基（化合物9），使用叔丁氧羰基和叔丁基分别保护天冬氨酸的氨基和羧基，即化合物10。合成的S-叔丁基-L-半胱氨酸甲酯（化合物9）与N-叔丁氧羰基-L-天冬氨酸-4-叔丁酯二环己胺盐（化合物10）通过EDCI-HOBt偶联试剂缩合，进行二肽母体结构的构建（如上图）。
1. (E/Z)-3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙烯酸甲酯（化合物6）的结构鉴定
1H-NMR（300 MHz，CDCl3）E型：δ 7.59（d，J=15.9 Hz，1H），7.13（d，J=2.1 Hz，1H），7.01（ddd，J=8.3，2.1，0.5 Hz，1H），6.83（d，J=8.3 Hz，1H），6.28（d，J=16.0 Hz，1H），5.78（s，1H），3.90（s，3H），3.78（s，3H）；Z型：δ 7.32（d，J=2.2 Hz，1H），7.22（ddd，J=8.4，2.1，0.6 Hz，1H），6.79（d，J=6.7 Hz，1H），5.83（d，J=12.8 Hz，3H），3.89（s，3H），3.72（s，3H）。
从1H-NMR对2 种不同构型的化合物同时进行积分，可以得出2 种构型的同分异构体相对应的氢的积分之比为1/0.24=4.12，核磁数据与之前报道过的该物质的数据相符合。
2. 3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙酸甲酯的结构鉴定
1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ 6.77（d，J=1.9 Hz，1H），6.76（s，1H），6.67（dd，J=8.2，2.1 Hz，1H），3.86（s，3H），3.67（s，3H），2.85（t，J=7.9Hz，2H），2.59（dd，J=8.5，7.2 Hz，2H）。
13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ 173.75，145.88，145.40，134.16，119.95，114.82，111.04，56.32，51.95，36.21，30.69。
3. 3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙醛（7）的结构鉴定
1H NMR（300 MHz，CDCl3）δ 9.82（t，J=1.5 Hz，1H），6.82～6.77（m，2H），6.69（dd，J=8.2，2.1 Hz，1H），5.65（s，1H），3.88（s，3H），2.89（dd，J=7.8，6.3 Hz，2H），2.80～2.72（m，2H）。
13C NMR（75 MHz，CDCl3）δ 201.81，145.65，145.10，133.58，119.63，114.48，110.80，56.02，45.38，27.58。
4. S-叔丁基-L-半胱氨酸甲酯（9）的结构鉴定
1H NMR（300 MHz，CDCl3）δ 3.73（s，3H），3.64（dd，J=7.6，4.6 Hz，1H），2.93（dd，J=12.5，4.6 Hz，1H），2.75（dd，J=12.5，7.6 Hz，1H），1.31（s，9H）；
13C NMR（75 MHz，CDCl3）δ 174.58，54.64，52.32，42.59，33.57，31.03。
5. N-(N-叔丁氧羰基-4-叔丁酯-L-α-天冬氨酰)-S-叔丁基-L-半胱氨酸-1-甲酯（11）的结构鉴定
1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ 7.24（d，J=8.2 Hz，1H），5.67（d，J=8.4 Hz，1H），4.76（q，J=5.9 Hz，1H），4.57～4.32（m，1H），3.74（s，3H），3.03～2.53（m，4H），1.40（s，9H），1.38（s，9H），1.24（s，9H）；
13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ 171.07，170.84，170.70，155.41，81.69，80.33，52.59，52.36，50.61，42.64，37.41，31.93，31.44，30.81，30.25，29.69，28.35，28.05。
6. N-(L-α-天冬氨酰)-S-叔丁基-L-半胱氨-1-甲酯（12）的结构鉴定
1H NMR（600 MHz，MeOD）δ 4.65（dd，J=8.1，5.0 Hz，1H），4.26（dd，J=8.8，4.1 Hz，1H），3.75（s，3H），3.04（td，J=13.0，4.6 Hz，2H），2.98～2.84（m，2H），1.33（s，9H）。
13C NMR（151 MHz，MeOD）δ 172.65，171.92，169.28，54.64，53.08，50.83，43.47，36.01，31.18，28.29。
7. N-{N-[3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙基]-L-α-天冬氨酰}-S-叔丁基-L-半胱氨酸-1-甲酯（13）的结构鉴定
1H NMR（600 MHz，CDCl3）δ 8.55（d，J=29.8 Hz，1H），6.79（s，1H），6.71（d，J=7.8 Hz，1H），6.57（d，J=7.8 Hz，1H），4.70（q，J=7.3 Hz，1H），4.11（s，1H），3.81（s，3H），3.69 （s，3H），3.06～2.47（m，8H），1.98（q，J=14.8 Hz，2H），1.28（s，J=2.8 Hz，9H），0.92～0.82 （m，1H）。
13C NMR（151 MHz，CDCl3）δ 174.77，170.43，168.17，145.70，145.37，133.20，119.42，114.85，111.22，63.40，57.84，55.78，52.51，46.15，44.65，42.51，30.61，29.90，29.47，29.43。
红外光谱（KBr）：3 423、3 199、2 959、2 925、1 590、1 512、1 744、1 689、1 398、1 365、1 028、761、596 cm-1。
质谱（电喷雾离子源）m/z 471.1 [(M+H)+]，493.1[(M+Na)+]。
结 论
本实验以氨基酸为原料，设计二肽合成，并进行基团修饰，从而完成了40 000 倍二肽甜味剂N-{N-[3-(3-羟基-4-甲氧基苯基)丙基]-L-α-天冬氨酰}-S-叔丁基-L-半胱氨-1-甲酯的全合成，将以天冬氨酸苯丙氨酸为主的二肽甜味剂扩展到天冬氨酸半胱氨酸，丰富了二肽甜味剂的类型，同时将目前甜味剂的甜度从20 000 倍提升到40 000 倍，在二肽类甜味剂的合成方面取得了明显的进步。
本合成中的原料简便易得，合成步骤简单易行，且化合物中不含有苯丙氨酸，故适用于苯丙酮尿症患者，使用人群更为广泛，进而为开发绿色环保、甜度更高且符合人体生理要求的甜味剂提供了研究方向和目标。
