河北农业大学食品科技学院的陈 佳、桑亚新*和河北省食品检验研究院 河北省食品安全重点实验室的张 岩*等人使用ITS2、rbcL、matK、trnH-psbA序列的通用引物对苜蓿、马铃薯、木薯、番薯、玉米5大淀粉原物种进行聚合酶链式反应（PCR）扩增和测序比对，比较各序列的扩增效率和测序成功率，评价不同DNA条形码候选序列对淀粉原物种的鉴别能力，筛选出较适合的DNA条形码组合，并对市售淀粉及粉条制品进行物种鉴定和掺假判定，为植物DNA条形码技术在植物源食品的检测技术提供一定的参考。
1、DNA条形码序列片段的扩增
综合分析，ITS2和trnH-psbA扩增效率较高，在阳性样本的苜蓿、马铃薯、木薯、番薯和玉米中均扩增出清晰的条带。ITS2序列扩增条带大小在500 bp左右，其中在马铃薯中还扩增出700 bp左右大小的非特异条带。trnH-psbA在苜蓿、马铃薯、木薯中扩增出600 bp大小的条带，而在番薯和玉米中分别得到300 bp和700 bp大小的条带，扩增条带大小差异显着。matK序列引物的通用性较差，仅在马铃薯和红薯中扩增出条带，其中马铃薯中的条带较弱，扩增效果较差。而rbcL序列通用引物在苜蓿和番薯中呈现清晰单一的扩增条带，在马铃薯扩增结果中有非特异的较大片段，而在木薯中扩增效率较低。
2、PCR产物测序成功率
结果显示，ITS2和trnH-psbA的序列有效获得率较高，分别为60%和80%，而matK和rbcL片段的有效率仅为8%和24%。尽管统计样本容量较小，但统计结果仍为淀粉检验DNA条形码的有效选取提供一定的指导和参考。综上分析，ITS2和trnH-psbA基因组合可作为候选基因片段进行后续实验。
3、引物通用性验证结果
苜蓿、番薯、玉米3 个物种的不同品种均能通过ITS2引物扩增并完成比对鉴定，苜蓿、马铃薯、木薯、番薯4 个物种的不同品种均能通过trnH-psbA引物扩增并完成比对鉴定，因此可以说明ITS2和trnH-psbA引物组合的通用性良好。
4、实际样品的DNA鉴定
5 个淀粉样品和3 个粉条样品测序比对均为苜蓿，粉条4样品因PCR扩增效率低未得到结果。综合分析以上结果，自行购买的粉条和淀粉样品均掺有苜蓿成分，与样品包装标签成分不符，可判定为掺假样品。
讨 论
植物性食源物种种类多且复杂，加工工艺的提高使得植物性制品的原料很难通过形态特征等判定。食品加工制造业的不法商家在加工品中掺杂使假、以次充好，以低价原料冒充高价原料加工销售，扰乱公平竞争社会风气，损害消费者和守法生产商的利益。本研究结合ITS2和trnH-psbA组合对抽检的淀粉和粉条制品进行鉴定，经测序比对发现均掺有苜蓿成分。苜蓿与其他植物源材料相比，价格低廉。虽然掺入的苜蓿成分对人体无害，但其与产品标签标注不符，存在商业欺诈行为。植物DNA条形码技术的应用前景广，但需要DNA条形码数据库序列的不断完善，因此目前DNA条形码在产品鉴定中的应用较少。本研究为植物DNA条形码技术的在植物源食品物种鉴定方面的应用提供一定参考。
