中国肉类食品综合研究中心，北京食品科学研究院的范 维、高晓月、李莹莹*等人结合前期的研究成果，在确定了适用于禽畜肉中抗生素提取方法以及检测液配方的基础上，进一步克服了因菌种活化传代耗时较长及液体菌种无法运输等问题，开发出一种可检测动物源性食品中抗生素残留的高通量微生物显色初筛试剂盒，并对试剂盒的各方面性能加以验证。
1、菌株包埋方法的确定
虽然明胶和卡拉胶的菌株成活率较高，但两者机械强度较低，颗粒易破碎使得被包埋细胞泄出，并且明胶在切块时易黏连，不易操作，且通过后期显色实验发现，这两种载体存在显色不均的情况，因此这两种材料不适合作显色反应的载体。
2、菌株包埋条件优化结果
当pH值较低时，成球形状不规则，小球自身低pH值会使检测液中的指示剂变色，影响显色反应，且过酸会降低指示菌成活率；而当交联剂pH值较高时，小球加入到检测液后会升高其pH值，从而延长反应时间。因此，选择pH 6.0的硼酸-磷酸盐溶液作为交联剂。
3、样品提取效果验证
该提取方法对不同肌肉（瘦肉）样品中抗生素残留提取率为79.8%～88.1%，相对标准偏差为3.5%～5.2%。进一步对各提取液的检测效果进行验证发现，经加热沉淀蛋白后，鸭、鸡、猪肉样品的提取液呈现无色，离心后较为澄清，而牛、羊肉样品的上清液呈微红色，但只要其中抗生素残留超过微生物法检出限，不会对检测结果造成影响。
4、试剂盒检出限测定结果
本试剂盒各类抗生素的检出限均小于我国农业部规定的动物性食品中兽药最高残留限量，其中对β-内酰胺类和四环素类抗生素较为敏感，检出限分别为20～40、40～60 μg/kg，这与前人的研究的用嗜热脂肪芽孢杆菌检测牛奶中抗生素残留结果相似。
5、试剂盒稳定性测定结果
随着保存时间延长，反应时间和检出限均受到影响，这是由于菌体自身处于一个衰减的过程，随保存时间延长菌体数量和活性都会随之降低造成的，而15 d内试剂盒的反应时间和检出限均可保持稳定状态，因此，该试剂盒的最佳使用期限为15 d。
6、试剂盒评价结果
试剂盒检测共有24 个样品呈阳性，经色谱法验证，其中18 个阳性样品含有以上添加的抗生素残留，其余6 个为假阳性样品，据研究嗜热脂肪芽孢杆菌除对抗生素敏感外，对磺胺类、糖肽类等药物也有较高的敏感性，因此6 个假阳性样品存在含有其他抗生素的可能。
结 论
为了提高试剂盒的灵敏度和稳定性，本实验分析对比不同包埋方法，并对菌种包埋浓度、包埋剂添加量及交联剂pH值进行了优化。该试剂盒对禽畜肉中常见的β-内酰氨类、四环素、氨基糖苷类、大环内酯类抗生素药物无论是单独使用还是配伍使用都具有较好的检测灵敏度，在15 d的保存期内，具有较好的检测稳定性。该试剂盒操作简便、快捷，包括前处理在内4～5 h即可完成检测，结果肉眼可辨别，无需借助大型仪器。采用可独立拆分的微孔板，可根据样品数随意调节，做到用同一前处理方法、同一检测体系对不同样品、不同抗生素的高通量检测。用色谱法对试剂盒筛检出的46 个阴性样品进行验证，均无抗生素药物残留，说明该试剂盒结果可靠，无假阴性存在。
