集美大学食品与生物工程学院的谢雪琼、钟 婵、曹敏杰*等人拟以坛紫菜为研究对象，探讨胃、肠液蛋白酶对其消化特性，分析消化产物的PEP抑制活性，并优化制备PEP抑制肽的酶解条件，以期为坛紫菜高值化利用提供理论参考。
1、坛紫菜模拟胃、肠液消化
消化60 min后，产物中PEP抑制活性显着提高；继续经模拟肠液消化120 min后，终产物的PEP抑制活性没有明显变化。由此可知，坛紫菜中的蛋白质是PEP抑制活性肽的潜在资源，且胃、肠液，特别是胃液消化有助于提高其对PEP的抑制活性。
2、R-PE的分离纯化
坛紫菜经硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose阴离子交换柱层析，分离得到R-PE，纯化倍数为6.0 倍，得率达17.0%。该R-PE纯度系数（A565 nm/A280 nm=5.4）较红毛藻源R-PE（A565 nm/A280 nm=5.1）高，达到试剂级（＞4.0），但其得率较红毛藻源R-PE（43.4%）低。
3、酶法制备PEP抑制肽的条件确定
胃蛋白酶比例及消化时间的确定
利用R-PE酶法制备PEP抑制肽的第1阶段酶解条件为：胃蛋白酶与R-PE比例0.5%（m/m）、酶解时间30 min，pH 1.2，温度37 ℃。
混合酶比例及消化时间的确定
利用R-PE酶法制备PEP抑制肽的第2阶段酶解条件为混合酶与R-PE比例0.25%（m/m）、酶解时间30 min、pH 7.5、温度37 ℃。
4、R-PE水解液的Tricine-SDS-PAGE分析
与酶解前的蛋白（泳道C）相比，胃蛋白酶和混合酶对R-PE均有明显的消化作用。在胃蛋白酶酶解5 min后，R-PE的α亚基、β亚基、γ亚基发生显着的降解；酶解5～30 min范围内，水解产物被胃蛋白酶继续降解；之后，进行第2阶段酶解，在30～60 min范围进一步被降解为更小分子的产物，而在90～150 min范围，酶解变化不明显。
5、R-PE水解液的分子质量分布
经过第1阶段胃蛋白酶酶解的R-PE，在第2阶段经混合酶得到进一步水解，特别是对分子质量大于5 kDa产物的酶解作用效果显着。由此知，经过两步酶解的R-PE几乎被完全水解，表明利用胃蛋白酶、混合酶对R-PE进行分步酶解，可制备出低分子质量、较高活性的R-PE源PEP抑制肽。
6、R-PE水解液的PEP抑制活性
R-PE水解液的PEP抑制活性IC50为136.35 μg/mL，低于其他动物来源的PEP抑制肽的IC50，如沙丁鱼鱼头水解液IC50（9 570±1 480）μg/mL、金枪鱼鱼头水解液IC50（3 300±1 050）μg/mL、酪蛋白钠水解产物IC50（770 μg/mL）、乳铁蛋白源PEP抑制肽PKH11的IC50（2 100±200）μg/mL。
结 论
本研究以福建高产的坛紫菜为原料，利用硫酸铵盐析和离子交换技术获得高纯度藻红蛋白，为对该蛋白的食品学功能分析创造了条件。利用胃、肠液消化酶分步酶解坛紫菜R-PE，并优化酶解条件获得PEP抑制肽的制备工艺。采用Tricine-SDS-PAGE验证酶解效果，凝胶过滤色谱法测得R-PE水解液中分子质量在3 kDa以下的小肽含量为86.06%。制备的R-PE酶解液通过可逆非竞争性抑制模式对PEP表现较高的抑制活性，其IC50为136.35 μg/mL。紫菜中含量丰富的R-PE是潜在的PEP抑制活性肽来源，今后有必要对PEP抑制肽进行分离纯化并解明它们的结构。本研究为坛紫菜作为功能性食品的高值化利用提供了理论参考。
