1 粗蛋白检测之采样过程
样品采集是否规范,是粗蛋白测定准确与否的基础。虽然采样方法随不同的物品而有所不同,一般来说可根据物品均匀性质分为下列两类。
1.1 均匀性质物品 对于均匀性质的物品,每一小部分的成分与全部的成分相同,可以采取其任何一部分作为分析样本。在通常情况下,粉未或研碎的物品可用“四分法”来采样。
1.2 不均匀性质物品 不均匀的物品,须采取多量样本,然后在取出的样本中重复取样多次,得出一连串逐渐减少的样本,叫做初级、次级、三级??样本。分析用的样本可以在最末一级样本中制备,使样本能代表全部物品。所采用的取样方法称为“几何法”。
2 粗蛋白检测之粉碎要求
根据饲料工业标准标定,样品要求粉碎后全部通过40目(0.45 mm)分样筛,然后混合均匀放入密封容器。一般饲料样品颗粒较大,成分复杂,检测时称量样品少,如果细度不够,必然造成称样时样品不均匀,这是造成结果误差的重要原因。
3 粗蛋白检测称样要求
用分析天平称取试样0.5～1 g (精确到0.000 1) ,一式两份,要求在称样时数量要合适,不能太少也不能太多。一般饲料的称样量为0.5 g,若粗蛋白含量为3%～5%的,称样量就应高于0.5 g,否则误差就大。
4 粗蛋白检测之消化过程
4.1 消化温度与速度 消化时速度要缓慢,开始要用小火,待样品焦化后,逐步缓慢加强火力。如果升温过快,则部分含氮物质来不及转化成硫酸铵 而以气体形式损失掉,会造成检测结果偏低。注意经常将溅到瓶壁上的黑渣摇入瓶底硫酸溶液中,以避免消化不完全。消化时要控制好温度,以380 ℃时最宜。过低则消化时间长,消化不完全,所以消化时最好采用可调式电炉。
4.2 注意问题 消化时还应在凯氏瓶内加几粒玻璃珠,用以防止硫酸涨沸流失,并在凯氏烧瓶口盖一个小漏斗,使蒸汽凝结回流,这样会使测定结果更准确。当消化液达到透明状态时,并非表示样品已消化完全,为防止结果偏低,至少还须加热消化2小时左右。
5 粗蛋白检测之蒸馏过程
蒸馏过程中必须确保系统封闭良好。样液加入蒸馏装置后,应先塞好入口玻璃塞,并在入口处用蒸馏水密封,然后再加入碱液,加入时要缓慢,不可太快,加完碱液后不可再次打开入口玻璃塞。这个顺序不能弄错,否则会造成氨损失,使测定结果偏低。
6 粗蛋白检测之滴定过程
滴定用的盐酸标准溶液浓度必须准确。标准溶液在使用前应将溶剂瓶上下摇动几次,以便使凝结到瓶壁上的水珠完全溶入溶液之中,保证溶液浓度均匀一致。滴定时注意排除滴定管底部的气泡,确保滴定结果准确。
7 粗蛋白检测之做好空白检测工作
空白测定是衡量整个操作过程中一个非常重要的综合性指标,良好的空白值是保证检测结果准确的前提,空白值不能超过标准范围。检测时如果发现空白值过高,应认真查找原因并及时解决。空白值超标一般是由于所用试剂级别不够、试验用水不纯或玻璃器皿不干净等原因造成的。
8 粗蛋白检测之自我校验
应定期校验凯氏定氮仪气密性。验证方法:为用分析纯硫酸铵代替试样,按试样检测步骤操作,测其含氮量应为21.19% ±012% ,如结果不符则应检查称样、消化、加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。
