所谓细胞虐我千百遍，我待细胞如初恋。细胞培养过程中，总是会出现各种意想不到的问题，一不留神就会全盘皆输。对于实验操作不太熟悉的朋友，与其一边做着科研一边拜着上帝祈祷实验成功，不如看看北纳生物技术老师如何操作。
今天要学习的是贴壁细胞的保藏方法，大家赶紧拿出小本本认真听讲吧！
一、观察细胞状态
贴壁细胞密度达到80%，即可以细胞冻存形式进行保藏，拍照，记录细胞状态；
二、细胞清洗
培养皿表面消毒后，转移至生物安全柜中，去除培养皿中培养液，加入12mlPBS，轻轻摇晃培养皿清洗细胞，随后吸除PBS清洗液；
三、细胞消化
将2ml胰酶加入培养皿中，完全覆盖细胞，置于显微镜下观察（期间禁止摇晃培养皿），当细胞刚开始脱落时，立即转移至生物安全柜中，除去大部分胰酶，剩余约0.5ml胰酶，转移至培养箱内继续消化，每30秒肉眼观察细胞状态，至细胞成流沙状完全脱落，转移至生物安全柜中，加入12ml完全培养基，终止消化；
四、细胞离心
将终止消化后的细胞悬液吹打均匀，吸取至15ml离心管中，1000r/min（110g），离心3min；
五、细胞冻存
离心后去除细胞上清液，按照冻存细胞量5*10^5/ml，吸取冻存液重悬细胞沉淀，吹打均匀后分装至相应的冻存管中，进行冻存；
六、细胞保藏
冻存管做好标记，放至程序降温盒中，于4℃冰箱放置30min，转移至-80℃超低温冰箱过夜，将过夜后的冻存细胞转移至液氮中保藏。
