来自河北农业大学食品科技学院的孙思明、徐宏伟、郭凯元和檀建新*等人通过研究山楂PCs提取物及其主要成分对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖抑制作用及其对抗氧化和细胞凋亡的影响，探究不同PCs的作用功效，为充分合理地利用丰富的膳食PCs资源提供实验依据，为肝癌的防治提供新思路。
1、山楂PCs对细胞增殖的影响
处理时间相同（如24 h）时，山楂PCs提取物对SMMC-7721细胞的增殖抑制率随质量浓度提高而增加，呈现明显的质量浓度依赖效应，质量浓度为6.25、12.5、25、50、100 μg/mL的PCs提取物抑制率分别为2.77%、6.40%、10.85%、22.91%、39.19%；表儿茶素和PCs B2也有类似的效应。同一质量浓度的PCs处理不同时间，其抑制率随处理时间的延长而升高，表现出时间依赖性，如25 μg/mL PCs B2处理24 h时抑制率为16.08%，48 h时则升至到31.95%，增加了近1 倍。虽然山楂PCs提取物、表儿茶素和PCs B2对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用规律相近，但是相同质量浓度处理相同时间的不同种PCs对SMMC-7721细胞增殖的抑制效果却有一定差异，在质量浓度低于25 μg/mL时，PCs B2对细胞增殖的抑制效果最好，表儿茶素对细胞增殖的抑制率最低；而在50、100 μg/mL时，山楂PCs提取物的细胞增殖抑制率最高。由此可见，不同种类的PCs可呈浓度和时间依赖性的对SMMC-7721细胞增殖产生抑制作用，且与对照组（细胞增殖抑制率为0，未在结果图中显示）相比差异显着（P＜0.05）。采用相同质量浓度PCs和时间处理HL-7702细胞，与无药物处理的细胞（细胞存活率为100%，未在结果图中显示）相比，3 种PCs对HL-7702细胞存活率无明显影响，低质量浓度下还略有提高作用，说明本实验选取的PCs质量浓度和处理时间对正常细胞无毒害作用。
2、PCs处理SMMC-7721细胞的形态变化和细胞凋亡情况
未加PCs处理的对照组细胞呈现原有的多角形，大小相似、紧密相连、贴壁良好、均匀透亮。山楂PCs提取物、表儿茶素和PCs B2处理组细胞大小不一、数量减少，形态变小、变圆，且出现脱壁漂浮现象，有凋亡小体产生，胞内亮度不均，表明细胞出现不同程度的凋亡状态，程度由重到轻依次为山楂PCs提取物、PCs B2和表儿茶素处理组，这前期得到的结果一致。未经处理的对照组细胞染色后呈现均匀的暗蓝色荧光，细胞形态整齐均一；而用PCs处理后细胞膜完整性降低、通透性增加，细胞收缩、核染色质固缩，染色后细胞核局部呈现出比对照组更强烈的蓝色荧光，凋亡晚期细胞可看到凋亡小体，这些特征说明3 种PCs均可诱导SMMC-7721细胞凋亡，且凋亡特征随着PCs质量浓度的增加而越发明显，山楂PCs提取物促进SMMC-7721细胞凋亡的效果优于其他两种，再次印证了前文中得到的结果。
3、PCs对SMMC-7721细胞中MDA含量和抗氧化酶活力的影响
PCs可以显着提高SMMC-7721细胞中MDA含量（P＜0.05），且呈浓度依赖性。山楂PCs提取物处理的细胞中MDA相对增加率最高，其次为PCs B2和表儿茶素。与对照组相比，150 μg/mL山楂PCs提取物、PCs B2和表儿茶素使细胞中MDA含量分别增加26.11%、21.08%和20.01%。结果表明PCs可以显着降低SMMC-7721细胞中SOD活力（P＜0.05），且呈浓度依赖性。与对照组相比，150 μg/mL山楂PCs提取物、PCs B2和表儿茶素分别使细胞中SOD活力降低23.06%、22.84%和16.10%。PCs可以显着降低SMMC-7721细胞中GSH-Px活力（P＜0.05），且呈浓度依赖性。3 种PCs的作用效果和规律与其对SOD活力的影响表现出高度一致性。与对照组相比，150 μg/mL山楂PCs提取物、PCs B2和表儿茶素分别使细胞中GSH-Px活力降低36.97%、34.31%和31.80%。与对照组相比，PCs可以显着降低SMMC-7721细胞中CAT活力（P＜0.05），且呈浓度依赖性。150 μg/mL山楂PCs提取物、PCs B2和表儿茶素对细胞中CAT活力的相对降低率分别为13.20%、11.05%和9.12%。
4、PCs对SMMC-7721细胞Na＋K＋-ATP酶活力的影响
PCs呈浓度依赖性的显着降低SMMC-7721细胞中Na＋K＋-ATP酶的活力（P＜0.05），说明细胞吸钾排钠功能和细胞主动运输能力的减弱。3 种PCs中，山楂PCs提取物对细胞中Na＋K＋-ATP酶活力相对降低率最高，其次为PCs B2和表儿茶素。与对照组相比，150 μg/mL山楂PCs提取物、PCs B2和表儿茶素对细胞中Na＋K＋-ATP酶活力分别降低21.13%、17.41%和16.01%，这一结果前期抗氧化酶活力的变化相似。
5、PCs对SMMC-7721细胞凋亡信号转导的影响
PCs对SMMC-7721细胞作用后，PCs提取物、PCs B2和表儿茶素都使Caspase-8的表达呈现增加趋势；同时，促凋亡蛋白Bax的表达量有增加的趋势，而抑制凋亡蛋白Bcl-2表达则有降低的趋势，说明Bax与Bcl-2比值增大。Caspase-3在Caspase-8和Bax、Bcl-2引发信号转导途径中的级联反应的下游，结果显示Caspase-3被活化，产生活化的Caspase-3，导致PARP片段化增加，最终诱导细胞凋亡。
结 论
山楂原花青素提取物、表儿茶素和原花青素B2呈时间和质量浓度依赖性地显着抑制SMMC-7721细胞的增殖（P＜0.05），促进细胞凋亡；与对照组相比，SMMC-7721细胞中SOD、CAT、GSH-Px、Na＋K＋-ATP酶活力降低，MDA含量升高；细胞凋亡相关蛋白半胱天冬酶-8、半胱天冬酶-3、Bcl-2相关X蛋白表达量和多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶片段化增加，Bcl-2表达量降低。结论：山楂原花青素可通过影响抗氧化酶活力和细胞凋亡相关蛋白来抑制SMMC-7721细胞增殖，促进细胞凋亡。
