来自江南大学食品科学与技术国家重点实验室的田许、杨玉辉、王雅楠和乐国伟*等人以HFD C57BL/6小鼠为实验动物模型,研究FCPs干预对HFD小鼠肝脏脂代谢和氧化还原状态的影响,为FCPs功能的开发和利用提供实验依据和理论支持。
1、FCPs对HFD小鼠体质量的影响
在整个饲喂周期中,各组小鼠的体质量从初始时没有差异(P>0.05),到第11周时为快速增长的阶段,随后进入体质量增长相对平缓的时期。HF组小鼠的体质量增长从高脂饲喂开始后一直高于CON组,第11、22周时均有显着差异,并且结果有统计学意义(P<0.05);与HF组相比,PHF组的体质量和体质量增长率没有出现统计学差异(P>0.05)。
2、FCPs对HFD小鼠采食量和日均采食总能量的影响
第7周时,HF组的采食量相比CON组有减少趋势,而PHF组则有所增加,但均未出现统计学差异(P>0.05)。至第14周,与CON相比,HF组的采食量显着减少(P<0.05);与HF组相比,PHF组的采食量增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。到21 周终末,HF组的采食量相比CON组仍保持显着减少(P<0.05);而PHF的采食量相比HF组明显增加(P<0.05)。
由于各组饲料配方的不同,同质量的正常饲料与高脂饲料所提供的能量并不相同,因此在采食量的基础上又统计分析了各组小鼠的日均采食总能量。可见HF组的日均采食总能量与CON组相比在第7、14周均有增加趋势,但没有统计学差异(P>0.05);与HF组相比,PHF组的日均采食总能量均有增加趋势,第7周时无统计学差异(P>0.05),而第14、21周均显着增加(P<0.05)。
3、FCPs对HFD小鼠脂肪消化吸收的影响
第11、22周时,与CON组相比,HF组的脂肪表观消化率显着降低(P<0.05);相比HF组,PHF组的脂肪表观消化率显着升高(P<0.05)。用脂肪表观消化率和采食量相乘,计算并统计了各组小鼠的日均脂肪表观消化量。第11和22周时,相比CON组,HF组的日均脂肪表观消化量显着降低(P<0.05);与HF组相比,PHF组的脂肪表观消化率在第11、22周时均显着增加(P<0.05)。
4、FCPs对HFD小鼠肝脏质量和组织形态的影响
在第11、22周时,相比CON组,HF组的肝脏质量显着增加(P<0.05);与HF组相比,PHF组的肝脏质量在第11周时显着增加(P<0.05),至22周时两者差异没有统计学意义(P>0.05)。对HE染色的肝脏石蜡切片进行镜检,相比CON组,可见第11、22周时HF组小鼠的肝细胞均出现大量脂肪空泡,细胞形状和排列出现紊乱,空泡面积随饲喂时间的增长有明显变大的趋势;与HF组相比,第11周时,PHF组也出现了较多的脂肪空泡和肝细胞形态紊乱,但空泡较小,第22周时,PHF组的空泡大小和数量都比HF组有明显改善。
通过油红O染色小鼠肝脏冰冻切片,其中的脂肪被染为红色,可以观察到,相比CON组,HF组小鼠的肝脏脂肪浸润程度在第11、22周时都明显增加;与HF组相比,PHF组的肝脏脂肪浸润程度在第22周时明显降低。
分别统计HE染色切片中的脂肪空泡面积和油红O切片中的脂肪浸润面积占视野总面积的比例,来衡量肝脏脂肪蓄积的程度。相比CON组,第11、22周时,HF组小鼠的肝脏脂肪空泡面积比和脂肪浸润面积比均显着增加(P<0.05);与HF组相比,PHF组小鼠在第11、22周时的脂肪空泡面积比显着降低(P<0.05),脂肪浸润面积比在第11周时没有显着差异(P>0.05),第22周时显着降低(P<0.05)。
5、FCPs对HFD小鼠肝脏脂肪含量的影响
与CON组相比,HF组第11、22周时TG、TC和FFA水平均显着升高(P<0.05);与HF组相比,PHF组在第11周时TG、TC和FFA水平均无统计学差异(P>0.05),至第22周时,PHF组TG和FFA水平显着下降(P<0.05),TC水平仍无统计学差异(P>0.05)。
6、FCPs对HFD小鼠肝脏脂肪合成相关基因表达的影响
与CON相比,第11周时HF组的肝脏脂肪合成关键基因表达均有上调的趋势,其中ACC1 mRNA水平没有统计学差异(P>0.05),FAS和SREBP1c mRNA水平均显着上调(P<0.05),至第22周时,三者均有显着上调(P<0.05);相比HF组,PHF组两个周期中的ACC1mRNA水平和第11周时的SREBP1c mRNA水平均有下调趋势,但没有统计学差异(P>0.05),其他周期中的各脂肪合成关键基因表达均没有明显变化(P>0.05)。
7、FCPs对HFD小鼠肝脏脂肪分解相关基因表达的影响
与CON组相比,HF组各周期的脂肪分解关键基因表达均有下调的趋势,其中第11周时的CPT1mRNA水平和第22周时的PPARα mRNA水平显着下调(P<0.05),其他周期中的各基因表达没有统计学差异(P>0.05);相比HF组,第11周时PHF组的CYP7A1mRNA水平显着下调(P<0.05),PPARα mRNA水平有下调趋势但差异没有统计学意义(P>0.05),CPT1mRNA水平有上调趋势但也没有统计学差异(P>0.05),第22周终末,PHF组的CYP7A1、CPT1和PPARα的mRNA水平均显着上调(P<0.05)。
8、FCPs对HFD小鼠肝脏氧化还原状态的影响
与CON组相比,HF组的ROS水平在两个周期中均显着增加(P<0.05);相比HF组,PHF组的ROS水平表现出减少趋势,其中第11周时差异没有统计学意义(P>0.05),第22周时显着减少(P<0.05)。第11周时,与CON组相比,HF组的肝脏MDA水平显着增加(P<0.05)、GSH-Px活力和GSH/GSSG比值显着降低(P<0.05),T-AOC水平没有统计学差异(P>0.05);相比HF组,PHF组的MDA水平有减少趋势,但没有统计学差异(P>0.05),GSH-Px活力和GSH/GSSG比值均显着升高(P<0.05),T-AOC水平没有统计学差异(P>0.05)。至第22周终末,与CON组相比,HF组的T-AOC水平、GSH-Px活力和GSH/GSSG比值显着降低(P<0.05),MDA水平显着增加(P<0.05);相比HF组,PHF组的T-AOC水平和GSH-Px活力显着升高(P<0.05),MDA水平和GSH/GSSG比值均有改善,但没有统计学差异(P>0.05)。
结 论
第22周时,与HF组相比,PHF组小鼠的采食量、脂肪和能量摄入显着增加(P<0.05),肝脏的TG、FFA、脂肪空泡和脂肪浸润面积比明显降低(P<0.05),脂肪分解关键基因CYP7A1、PPARα和CPT1的mRNA表达水平显着上调(P<0.05),肝脏的ROS水平显着降低(P<0.05),T-AOC水平和GSH-Px活力显着升高(P<0.05)。结论:质量分数1% FCPs干预可能通过改善HFD小鼠肝脏氧化还原状态,促进肝脏脂肪分解代谢,起到减少小鼠肝脏脂肪蓄积和改善脂代谢。