本方法规定了食用油中苯并（a）芘的胶体金免疫层析快速检测方法。
本方法适用于食用油中苯并（a）芘的快速测定。
2 原理
本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苯并（a）芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苯并（a）芘进行定性判定。
3 试剂和材料
除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。
3.1 试剂
3.1.1正己烷：色谱纯。
3.1.2乙腈：色谱纯。
3.1.3二甲基亚砜（DMSO）。
3.1.4NaH2PO4o2H2O。
3.1.5Na2HPO4o12H2O。
3.1.6氯化钠。
3.1.7吐温-20。
3.1.8氢氧化钠溶液（2 mol/L）：称取80g氢氧化钠用水溶解，并定容至1L。
3.1.9PBST溶液：称取0.2965g NaH2PO4o2H2O、2.9g Na2HPO4o12H2O、8.76g氯化钠与0.55g吐温-20用水溶解并定容至1L。
3.2 参考物质
苯并（a）芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%。
表1 苯并（a）芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量
注：或等同可溯源物质。
3.3 标准溶液的配制
苯并（a）芘标准储备液（0.1 mg/mL）：精密称取苯并（a）芘标准品（3.2）适量，置于10 mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为0.1 mg/mL的苯并（a）芘标准储备液；或可直接购买苯并（a）芘标准储备液。0 ℃~5 ℃避光保存备用，有效期1年。
3.4 材料
苯并（a）芘胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为食用油。
3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。
3.4.2 试纸条或检测卡。
4 仪器和设备
4.1 移液器：100?L、1 mL、5mL和10mL。
4.2 涡旋混合器。
4.3 离心机：转速≥4000 r/min。
4.4 电子天平：感量为0.01 g。
4.5 氮吹仪或空气吹干仪（带温度控制）。
5 分析步骤
5.1 试样制备
取适量有代表性样品充分混匀。
5.2 试样提取和净化除脂
称取10g油样于离心管中，加入5mL 正己烷（3.1.1）和15mL DMSO（3.1.3）并混合均匀。漩涡振荡2min，然后4000 r/min离心2min。弃去上层正己烷层。加入5mL 正己烷（3.1.1），漩涡振荡30s，然后4000 r/min离心30s。弃去上层正己烷层。加入10mL 氢氧化钠溶液（2 mol/L）（3.1.8）和15mL正己烷（3.1.1），漩涡振荡30s，然后4000 r/min离心30s。吸取上层正己烷层于15mL离心管，4000 r/min离心2min。取全部正己烷层于氮吹管中，50℃氮吹或空气吹10min，吹干后加入200μL DMSO（3.1.3）复溶，混合均匀，此为待测液。
5.3 测定步骤
打开试纸筒，取出所需数量的红色反应微孔（取出微孔后，立即盖好桶盖，以防受潮）。往微孔中加入200μL的PBST溶液，再加入50μL待测液，上下抽吸5-10次至微孔试剂混合均匀，室温（20-25℃）反应7min。将已做好标记的试纸条插入至上述红色微孔中，使样品垫充分进入样品中，并计时7min。从微孔中取出试纸条，弃去试纸条下端的样品垫，进行结果判定。
5.4 质控试验
每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。
5.4.1 空白试验
称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
5.4.2 加标质控试验
准确称取空白试样（精确至0.01g）置于玻璃试剂瓶中，加入一定体积的苯并（a）芘标准储备液（0.1mg/mL）（3.3.1），使试样中苯并（a）芘浓度为10μg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。
6 结果判定方式
由于长时间放置会引起质控线（C线）与检测线（T线）颜色的变化，需在规定时间内进行结果判定。试纸条与检测卡如图1所示。结果判定也可根据产品说明书进行。
6.1 读数仪测定结果
通过读数仪对结果进行判读，根据不同厂家仪器规定进行判读。
无效：质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
阳性：若检测结果显示"+"（阳性），表示试样中含有待测组分且其含量大于等于方法检出限。
阴性：若检测结果显示"-"（阴性），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检出限。
6.2 目视判定
通过对比质控线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。
无效：质控线（C线）不显色，无论检测线（T线）是否显色，均表示实验结果无效。
阳性：质控线（C线）显色，若检测线（T线）不出现或出现但颜色浅于质控线（C线），表示试样中含有待测组分且其含量高于方法检出限，判为阳性。
阴性：质控线（C线）显色，若检测线（T线）颜色深于或等于质控线（C线），表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检出限，判为阴性。
6.3 质控实验要求
空白试验测定结果应为阴性，加标质控试验测定结果应为阳性。
7 结论
当检测结果为阳性时，应对结果进行确证。
8 性能指标
8.1 检测限：10μg/kg。
8.2 灵敏度：≥95%。
8.3 特异性：≥85%。
8.4 假阴性率：≤5%。
8.5 假阳性率：≤15%。
注：性能指标计算方法参见附录A。
9 其他
本方法分析步骤和结果判定可以根据厂家试剂盒的说明书进行，但应符合或优于本方法规定的性能指标。
本方法所述试剂、试剂盒信息及操作步骤是为给方法使用者提供方便，在使用本方法时不做限定。方法使用者在使用替代试剂、试剂盒或操作步骤前，须对其进行考察，应满足本方法规定的各项性能指标。
本方法参比标准为GB 5009.27-2016《食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定》。
本方法使用试剂盒可能与苯并（a）蒽、苯并（b）荧蒽、苯并（e）芘、苯并（j）荧蒽等物质存在交叉反应，当结果判定为阳性时应对结果进行确证。
