沈阳农业大学食品学院的宛美志、孟宪军*通过对蔓越莓花色苷进行提取、纯化、花色苷组成鉴定和抗氧化能力测定,为蔓越莓资源的发展、评价及利用提供理论依据。
1、2 种方法提取蔓越莓花色苷含量、提取率及提取条件的比较
超高压辅助提取蔓越莓花色苷提取率为(94.92±0.54)%,常规溶剂提取蔓越莓花色苷提取率为(84.65±1.36)%。与常规溶剂提取法相比,超高压辅助提取法时间短,操作条件温和(不需加热),提取率显着高于常规溶剂提取法,因此,采用超高压辅助提取蔓越莓花色苷更合适。
2、蔓越莓花色苷HPLC-MS联用分析鉴定结果
峰1物质分子离子m/z 625,碎片离子m/z 463、301,是由分子离子失去一分子己糖苷[M-162]+而成,m/z 463和m/z 301之间也相差一个162的己糖苷,且m/z 301是芍药素的配离子峰,推测峰1物质可能是带有2 个己糖苷的芍药素花色苷,参考相关文献可知峰1物质是芍药素-3,5-二己糖苷。该种花色苷首次在蔓越莓中被检测到。
3、蔓越莓花色苷抗氧化能力测定结果
DPPH自由基清除能力测定结果
花色苷的IC50值为92.81 μg/mL,VC的IC50值为129.82 μg/mL,250 μg/mL花色苷和VC的清除率均在90%以上。原理为花色苷和VC可以与DPPH自由基的单电子配对,使其在517 nm波长处的吸收减弱,花色苷接受DPPH的电子数量多于VC,褪色更显着,清除率更高,所以抗氧化能力更强。
ABTS+·清除能力测定结果
蔓越莓花色苷和VC对ABTS+·的清除能力均随着质量浓度的增加而增强,在相同质量浓度条件下,蔓越莓花色苷对ABTS+·的清除能力强于VC,根据统计学分析,蔓越莓花色苷和VC对ABTS+·的清除能力差异显着(P<0.05)。ABTS在氧化剂作用下氧化成绿色的ABTS+·,花色苷和VC可以抑制ABTS+·的产生,削弱其在734 nm波长处的吸收。
总抗氧化能力测定
在50~250 μg/mL范围内,蔓越莓花色苷和VC的总抗氧化能力均随着质量浓度的增加而增强,蔓越莓花色苷的总抗氧化能力显着高于VC(P<0.05),250 μg/mL蔓越莓花色苷和VC的总抗氧化能力分别为2.61、1.50 U/mL。蔓越莓花色苷的总抗氧化能力、DPPH自由基清除率和ABTS+·清除能力变化趋势一致,质量浓度越高,抗氧化能力越强,两者呈正相关。
结论
本实验采用超高压辅助提取法提取蔓越莓花色苷,提取条件为料液比1∶20(g/mL)、乙醇体积分数60%、pH 2.0、超高压压力400 MPa、提取时间12 min,花色苷含量为(75.49±0.43)mg/100 g;常规溶剂提取蔓越莓花色苷,提取条件为料液比1∶20(g/mL)、乙醇体积分数60%、pH 2.0、提取温度40 ℃、提取时间60 min,花色苷含量为(67.31±1.08)mg/100 g;蔓越莓中总花色苷含量为(79.52±0.50)mg/100 g,超高压辅助提取蔓越莓花色苷提取率为(94.92±0.54)%,常规溶剂提取蔓越莓花色苷提取率为(84.65±1.36)%,说明超高压辅助提取蔓越莓花色苷的效果较好。选择AB-8大孔树脂对蔓越莓花色苷粗提物进行纯化,冻干粉中花色苷含量从(46.10±0.92)mg/g提高到(309.26±2.37)mg/g。通过测定DPPH自由基清除率、ABTS+·清除能力、总抗氧化能力,比较蔓越莓花色苷与VC的抗氧化能力。结果表明:相同质量浓度条件下,蔓越莓花色苷的抗氧化能力强于VC。采用HPLC-MS联用技术对蔓越莓花色苷的组成进行鉴定,共鉴定出7 种花色苷,分别为芍药素-3,5-二己糖苷、矢车菊-3-半乳糖苷、矢车菊-3-葡萄糖苷、矢车菊-3-阿拉伯糖苷、芍药素-3-半乳糖苷、芍药素-3-葡萄糖苷、芍药素-3-阿拉伯糖苷,其中芍药素-3,5-二己糖苷首次在蔓越莓中被鉴定出。综上所述,超高压辅助提取蔓越莓花色苷效果较好,蔓越莓中花色苷含量较高,花色苷种类丰富,其抗氧化能力显着高于VC。