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桐城风鸭产香真菌的筛选与鉴定

放大字体  缩小字体 发布日期:2019-01-17
核心提示:国外对传统腌腊制品的风味研究主要集中在火腿、发酵香肠等产品,而在鸭肉腌腊制品发酵、风味等方面研究几乎是空白。我国在风鸭风味方面研究主要侧重于脂肪降解、氧化和蛋白质的分解等复杂的化学反应,而微生物对风鸭风味的贡献关注较少。
   国外对传统腌腊制品的风味研究主要集中在火腿、发酵香肠等产品,而在鸭肉腌腊制品发酵、风味等方面研究几乎是空白。我国在风鸭风味方面研究主要侧重于脂肪降解、氧化和蛋白质的分解等复杂的化学反应,而微生物对风鸭风味的贡献关注较少。自然界中的微生物具有强大的酶体系和丰富的代谢产物,可能存在潜在的风味发酵剂。目前肉类工业发酵剂细菌关注较多,主要是乳酸菌和葡萄球菌。乳酸菌作为发酵剂可以降低产品pH值和产生细菌素,有效抑制杂菌,其次乳酸菌代谢的乳酸能与醇类形成香味浓郁的酯类,而凝固酶阴性葡萄球菌作为发酵剂能抑制生物胺,有效代替亚硝酸盐,提高产品安全性,并形成很好的发酵风味。此外,研究表明酵母和霉菌能够在制酒、酱油等产品中产生重要风味,利用酿酒酵母菌、黑曲霉菌、米曲霉制作微生物饲料,有效提高畜禽产品品质、改善肉类风味。在酱猪蹄中加入米曲霉、黑曲霉,得到外观风味好、保质期长的产品。一方面,酵母菌和霉菌真菌可能产生酯类化合物,赋予传统干香肠的水果香味。另一方面,真菌在传统香肠中的潜在发酵作用尚未确定。合肥工业大学食品科学与工程学院的姚秀香、王 武*、李沛军等人从桐城风鸭中筛选产香真菌,分析产香菌株的挥发性代谢风味产物,以期为新型肉制品发酵剂的开发及桐城风鸭风味形成机制提供研究参考。
 
  1、产香菌株的筛选
 
  采用孟加拉红培养基对桐城风鸭中的霉菌进行分离,根据霉菌的菌落形态和感官评价,分离纯化出6 株气味良好的霉菌,将纯化后的霉菌转入PDA培养基中30 ℃培养7 d,每隔1 d进行感官评价,与未接种菌株的空白组进行香气比对,接种霉菌M3菌株的培养基产酯香,初步确定霉菌M3菌株代谢风味产物具有酯香类风味物质。
 
  2、产香菌株的形态学特征
 
  产香菌株M3菌丝体发达,呈现白色绒毛状,可初步确定为霉菌菌株。此外,实验发现M3菌株在常温和4 ℃低温下生长,能够在桐城风鸭的生产工艺中存活,生长周期在1 周左右,且随着菌株的生长,酯香味越来越浓郁。产香菌株Y1在孟加拉红培养基内呈现玫红色,且菌落比细菌大,生长周期长,初步确定为酵母菌株,筛选过程中发现Y1菌株生长周期在5 d左右,培养过程中产生的青香味浓郁,综上,2 株菌株均有作为发酵菌株的潜力。
 
  3、产香菌株挥发性代谢产物分析
 
  采用顶空固相微萃取技术结合GC-MS法测定产香酵母Y1在马铃薯葡萄糖培养体系下的挥发性代谢风味产物。与对照组相比,产香酵母Y1在马铃薯葡萄糖培养体系下,出现1-戊醇和苯乙醇两个吸收峰。前人研究表明1-戊醇香气阈值为4 000 μg/kg,带有面包香、酒香和果香;而苯乙醇具有新鲜面包香、清甜的玫瑰样花香,这种香味描述与实验结果一致,因此,产香酵母Y1在马铃薯葡萄糖培养体系下代谢产生的青香味来自于1-戊醇和苯乙醇2 种风味物质的共同作用。
 
  考虑菌株在不同的培养体系下可能会产生不同的代谢风味,研究产香酵母Y1在模拟肉体系下的挥发性风味变化,采用顶空固相微萃取技术结合GC-MS法测定产香酵母Y1在模拟肉体系下的挥发性代谢风味产物。与对照组相比,产香酵母Y1在模拟肉体系下同样发现1-戊醇和苯乙醇2 种风味物质吸收峰。实验过程中发现产香酵母Y1能有效改善模拟肉体系的风味,进一步推断这种风味的改变来自于1-戊醇和苯乙醇2 种风味物质的共同作用。
 
  4、分子学鉴定结果
 
  产香酵母Y1和产香霉菌M3条带大约长度为600 bp。将PCR扩增产物回收测序,结果表明产香酵母Y1测序片段长度为590 bp,产香霉菌M3测序片段长度为599 bp。将测序后得到的基因序列置NCBI进行BLAST分析,结果表明产香酵母Y1与涎沫假丝酵母(Candida zeylanoides)序列同源性相似为99%,产香霉菌M3与烟管菌(Bjerkandera)序列同源性相似为100%。
 
  结 论
 
  JIE LUN
 
  选用孟加拉红和PDA培养基筛选、分离桐城风鸭中的产香真菌,得到1 株产香酵母Y1和1 株产香霉菌M3。Y1酵母经26S rDNA核苷酸测序分析鉴定为涎沫假丝酵母菌株,M3霉菌经ITS核苷酸测序分析鉴定为烟管菌株。采用顶空固相微萃取结合GC-MS技术,分别在马铃薯葡萄糖培养体系和模拟肉体系下进行这2 株产香菌株的挥发性代谢风味产物分析,结果表明,该株涎沫假丝酵母在2种体系下产生的青香味可能来自于1-戊醇和苯乙醇2 种物质的共同作用。而烟管菌在2 种体系下产生的酯香味可能
 
  来自于苯甲醛和癸内酯2 种风味物质的作用。此外,产香酵母Y1有作为生物生产1-戊醇、苯乙醇的开发潜力;产香霉菌M3有作为生物生产苯甲醛、γ-癸内酯的开发潜力。
 
 
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