1、产香菌株的筛选
采用孟加拉红培养基对桐城风鸭中的霉菌进行分离,根据霉菌的菌落形态和感官评价,分离纯化出6 株气味良好的霉菌,将纯化后的霉菌转入PDA培养基中30 ℃培养7 d,每隔1 d进行感官评价,与未接种菌株的空白组进行香气比对,接种霉菌M3菌株的培养基产酯香,初步确定霉菌M3菌株代谢风味产物具有酯香类风味物质。
2、产香菌株的形态学特征
产香菌株M3菌丝体发达,呈现白色绒毛状,可初步确定为霉菌菌株。此外,实验发现M3菌株在常温和4 ℃低温下生长,能够在桐城风鸭的生产工艺中存活,生长周期在1 周左右,且随着菌株的生长,酯香味越来越浓郁。产香菌株Y1在孟加拉红培养基内呈现玫红色,且菌落比细菌大,生长周期长,初步确定为酵母菌株,筛选过程中发现Y1菌株生长周期在5 d左右,培养过程中产生的青香味浓郁,综上,2 株菌株均有作为发酵菌株的潜力。
3、产香菌株挥发性代谢产物分析
采用顶空固相微萃取技术结合GC-MS法测定产香酵母Y1在马铃薯葡萄糖培养体系下的挥发性代谢风味产物。与对照组相比,产香酵母Y1在马铃薯葡萄糖培养体系下,出现1-戊醇和苯乙醇两个吸收峰。前人研究表明1-戊醇香气阈值为4 000 μg/kg,带有面包香、酒香和果香;而苯乙醇具有新鲜面包香、清甜的玫瑰样花香,这种香味描述与实验结果一致,因此,产香酵母Y1在马铃薯葡萄糖培养体系下代谢产生的青香味来自于1-戊醇和苯乙醇2 种风味物质的共同作用。
考虑菌株在不同的培养体系下可能会产生不同的代谢风味,研究产香酵母Y1在模拟肉体系下的挥发性风味变化,采用顶空固相微萃取技术结合GC-MS法测定产香酵母Y1在模拟肉体系下的挥发性代谢风味产物。与对照组相比,产香酵母Y1在模拟肉体系下同样发现1-戊醇和苯乙醇2 种风味物质吸收峰。实验过程中发现产香酵母Y1能有效改善模拟肉体系的风味,进一步推断这种风味的改变来自于1-戊醇和苯乙醇2 种风味物质的共同作用。
4、分子学鉴定结果
产香酵母Y1和产香霉菌M3条带大约长度为600 bp。将PCR扩增产物回收测序,结果表明产香酵母Y1测序片段长度为590 bp,产香霉菌M3测序片段长度为599 bp。将测序后得到的基因序列置NCBI进行BLAST分析,结果表明产香酵母Y1与涎沫假丝酵母(Candida zeylanoides)序列同源性相似为99%,产香霉菌M3与烟管菌(Bjerkandera)序列同源性相似为100%。
结 论
JIE LUN
选用孟加拉红和PDA培养基筛选、分离桐城风鸭中的产香真菌,得到1 株产香酵母Y1和1 株产香霉菌M3。Y1酵母经26S rDNA核苷酸测序分析鉴定为涎沫假丝酵母菌株,M3霉菌经ITS核苷酸测序分析鉴定为烟管菌株。采用顶空固相微萃取结合GC-MS技术,分别在马铃薯葡萄糖培养体系和模拟肉体系下进行这2 株产香菌株的挥发性代谢风味产物分析,结果表明,该株涎沫假丝酵母在2种体系下产生的青香味可能来自于1-戊醇和苯乙醇2 种物质的共同作用。而烟管菌在2 种体系下产生的酯香味可能
来自于苯甲醛和癸内酯2 种风味物质的作用。此外,产香酵母Y1有作为生物生产1-戊醇、苯乙醇的开发潜力;产香霉菌M3有作为生物生产苯甲醛、γ-癸内酯的开发潜力。