前期研究发现，麦胚蛋白经胰蛋白酶酶解所得多肽具有抑制α-葡萄糖苷酶的作用，这为工业化生产具有降血糖作用的功能性多肽提供了思路。江苏科技大学生物技术学院的颜 辉、张 琦、江明珠等人以α-葡萄糖苷酶活性抑制率为评价指标，建立超滤、离子交换、凝胶阻排和反相高效液相色谱（RP-HPLC）分离纯化方法，并采用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC-ESI-MS）鉴定出多肽的结构组成，阐明麦胚降血糖多肽发挥作用的物质基础，为开发麦胚降血糖肽提供理论基础。
1、麦胚降血糖肽实验高血糖模型小鼠的治疗效果
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麦胚多肽对糖尿病小鼠饮水量的影响
小鼠适应环境1 周。分为4 组，每组6 只，雌雄各半，分别为正常组（A），模型组（B），正常＋麦胚多肽干预组（C），模型＋麦胚多肽干预组（D）。实验前禁食12 h（不禁水），B、D组尾静脉注射75 mg/kg 4%四氧嘧啶溶液（使用pH 4.5的0.1 mol/L柠檬酸缓冲液配制浓度，现用现配），A、C组尾静脉注射等量生理盐水作为阴性对照。药物注射完毕，使用4%的葡萄糖溶液作为饮用水，防止小鼠低血糖。C、D组使用超滤后分子质量小于5 kDa多肽（3.24 mg/mL）灌胃给药，剂量48.6 mg/（kg?d）。A、B组灌胃等量的生理盐水，每间隔3 d取血检测血糖水平。
造模后B、D组的小鼠饮水量和A组相比差异极显着（P＜0.01），表明造模后小鼠饮水量急剧增加，糖尿病的多饮症状明显；灌胃麦胚多肽2 周后，D组与B组比较差异极显着（P＜0.01），表明麦胚蛋白多肽可以缓解小鼠饮水量增多的症状，D组和A组比较有显着差异（P＜0.01），提示麦胚蛋白治疗小鼠的多饮症状尚未恢复到正常水平。A组与C组比较无显着性差异，说明麦胚蛋白对正常小鼠的饮水量无影响作用。
02
麦胚多肽对糖尿病小鼠采食量的影响
造模后B、D组和A组比较，采食量差异极显着（P＜0.01），表明造模后小鼠采食量大量增加。经麦胚治疗2 周后，D组采食量与B组差异极显着（P＜0.01），提示麦胚多肽能够缓解小鼠采食量增多的症状；D组与A组比较有极显着差异（P＜0.01），表明经麦胚多肽治疗的糖尿病小鼠的采食量尚未恢复到正常水平。C组和A组之间无显着差异（P＞0.05），提示麦胚多肽对正常小鼠采食量无影响。
03
麦胚多肽对糖尿病小鼠体质量的影响
造模后，小鼠体质量无显着性差异。随着时间的推移，正常小鼠（A、C组）体质量上升，B、D组小鼠体质量无增加。经麦胚治疗2 周后，D组小鼠体质量与正常组A比较有极显着差异（P＜0.01），表明D组小鼠体质量未能够恢复到正常水平。A组与C组比较无显着性差异（P＞0.05），提示麦胚多肽对正常小鼠的体质量无影响。B组与D组小鼠比较无显着性差异（P＞0.05），表示经过15 d的麦胚多肽治疗，体质量未有明显变化。
04
麦胚多肽对糖尿病小鼠空腹血糖浓度
的影响
经麦胚降血糖肽治疗2 周后，D组与B组比较有极显着差异（P＜0.01），表明麦胚多肽对餐后血糖有明显降低作用；D组与A组比较有极显着性差异（P＜0.01），表明尚未恢复到正常水平。A组与C组比较无显着性差异（P＞0.05），提示麦胚多肽对正常小鼠的血糖无影响。
2、分离纯化
超滤
01
麦胚酶解多肽经过超滤后得到大于和小于5 kDa的两个组分，大于5 kDa的组分得率67.7%，IC50为14.33 mg/mL；小于5 kDa组分的多肽得率为32.3%，IC50为1.60 mg/mL。由此可见，活性成分主要在分子质量小于5 kDa组分中，对其进一步的分离。超滤后所得低分子质量组分的抑制率显着高于高分子质量组。
离子交换吸附
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1、静态吸附
随着时间的延长，711阴离子交换树脂吸附率几乎不变，且很低，表明对麦胚降血糖多肽的吸附作用很弱。732阳离子交换树脂的吸附率随着时间延长而增加，在60 min时达到最大值74.19%。DA201-C大孔吸附树脂在110 min时达到最大71.34%。
2、动态吸附
在0～50 min之间吸附率不断上升，50～70 min趋于平衡，DA201-C大孔树脂最大吸附率为36.04%，732型阳离子树脂最大吸附率为41.25%，因此732阳离子交换树脂效果比较好，选用此树脂进行后续实验。
3、树脂解吸
随着氨水质量分数的增加，洗脱率显着上升，0.5%、1.5%和2.5%氨水的洗脱率分别为78.14%、86.81%和98.13%，表明2.5%氨水基本可将吸附的多肽完全洗脱，因此选择2.5%的氨水作为732型阳离子交换树脂洗脱剂。
4、732型阳离子交换树脂动态分离
0～200 min是上样峰C-I，200～500 min是洗脱峰C-II。因此，经过732型阳离子交换树脂分离之后得到一个明显峰C-II，旋转蒸发浓缩后测IC50为0.30 mg/mL，对α-葡萄糖苷酶的活性比离子交换前（IC50为1.60 mg/mL）有显着提高，达到了纯化效果。
凝胶分离
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分离得到2 个组分C-II-1、C-II-2，分别收集两个多肽峰，测其对α-葡萄糖苷酶的抑制率，C-II-2为高活性组分，IC50为0.16 mg/mL，因此，用葡聚糖凝胶SephadexG-15对组分C-II-2进一步纯化。C-II-2经SephadexG-15分离后得到2 个组分C-II-2.1和C-II-2.2。分别收集、浓缩，组分C-II-2.1为高活性组分，对α-葡萄糖苷酶的IC50为0.13 mg/mL。
RP-HPLC分离
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色谱图中有8 个吸收峰，表示8 个（或组）多肽，命名为R1～R8，R1号峰所含多肽的IC50为0.098 mg/mL，其他组分测不出，由此可见R1号峰的活性最高；峰面积最大，提示组分含量也最大，因此，主要的降血糖肽在1号峰内。
3、多肽结构
在ESI过程，分子因附加一个正电荷（H+）以离子[M＋H]+的形式存在，通过磁场或电场根据m/z进行一级质谱（MS）鉴定，因此m/z为274.45的一级质谱片段，按照实际m/z为273.45片段值多肽组成序列进行分析。理论上多肽骨架断裂形成a1、b1、c1、a2、b2、c2、x1、y1、z1、x2、y2、z2等不同离子片段，在多肽序列分析中常用的片段为b1、y2、b2、y1等离子片段。
