1.实验过程中,每批样品预增菌液、选择性增菌液、分离平板等都要做空白对照。如果空白对照平板上出现沙门菌可疑菌落时,应废弃本次实验结果,并对增菌液、吸管、平皿、培养基、实验环境等进行污染来源分析。
2.定期使用鼠伤寒沙门菌ATCC14028菌种或相应定量活菌参考品,在P2实验室或阳性对照实验室内,用适当的食品样品进行阳性对照实验验证,染菌剂量应控制在10-100CFU/25g样品,并进行记录,此验证实验至少每2个月进行一次。
3.每2个月将所使用的培养基和生化试剂用GB4789.28-2013推荐的阳性和阴性对照标准菌种进行验证,并进行记录。
02
操作要点与注意事项
1.使用均质袋进行预增菌培养时,应使用带有底托的均质袋架子,防止培养过程中预增液泄露污染培养箱。
2.在进行TSI培养时,应将试管口松开,保持管内有充足的氧气,否则会产生过量的H2S。
3.由于三糖铁琼脂试验中底部分解需要厌氧环境,琼脂底部与斜面最低点的距离应不少于4厘米。
4.如果在培养22~24小时后,BS平板上未见沙门菌可疑菌落,应再培养22-24小时,如果仍没有可疑菌落,应挑取非典型菌落进行鉴定。
5.在培养箱中,为防止中间平皿过热,高度不得超过6个平皿。
6.本方法移液时可使用可连接吸管的电动移液器,在使用过程中,一旦液体进入电动移液器滤膜中、应立即对滤膜进行更换，以防止交叉污染。
7.当对易产生较大颗粒的样品(如肉类)进行检测时、建议使用带滤网均质袋,以方使均质后用吸管吸取匀液。
8.鉴于微量移波器移液头较短,为控制污染、在方法移液过程中不应使用。
9.BS平板应制备后避光常温保存，并在24小时内使用。
03
疑难解析
问题1.是否所有沙门菌均有致病力?
目前,所有已知的沙门对人、动物或二者均有致病力。
问题2.是否所有沙门菌均能产生硫化氢?
绝大多数沙门菌是硫化氢阳性,但也有例外,如甲型副伤案、猪伤寒等
沙门菌为硫化氢阴性。
问题3.为什么在没有典型菌落时仍要取非典型菌落进行鉴定?
根据经验,有3%~5%的沙门菌在选择性分离平板上呈现非典型性菌落。
问题4.是否所有沙门菌都有动力?
的确有少量的沙门菌缺失鞭毛,在半固体上不能呈现蔓延生长。
问题5.从哪里获得最新的沙门菌血清分型资料?
日前,最新版沙门菌血清分型方法及血清型抗原式为WHO与法国巴斯德研究所在2007年出版(第九版)，其中共计包括了2579个血清型，之后更新的血清型不在其中。
问题6. 50%甘油-BHI肉汤菌种冻存液如何配直和使用?
取BHI内汤干粉,按说明书加入1/2体积的水彻底溶解后,再加入等体积的甘油,混匀,分装于2mL菌种冻存管中(1.5mL/管),121℃高压灭菌15mim,-20℃储存备用。使用时,将BHI肉汤冻存管从-20℃取出,恢复至室温,将已鉴定完成的沙门菌用无菌棉签从营养琼脂平板上刮取,加入50%甘油-BHI肉汤中,混匀,用防冻记号笔标识清晰,-80℃长期保存备查。
问题7.如果在前增菌或选增菌结束后,肉汤中未见微生物生长,是否可以终止实险?
不可以。因为肉眼可见的细菌浓度为107CFU/ml,在此浓度以下,肉眼是不能发现的。
