1.应用本检验方法对食品样品进行菌落总数检验时,从一个样品的均质到倾注琼脂平板,应在15分钟内完成,故此,同时进行多个检样操作时应进行统筹安排。
2.检验中所使用的实验耗材,如培养基、稀释液、平皿、吸管等必须是完全灭菌的,如重复使用的耗材应彻底洗涤干净,不得残留有抑菌物质。
3.本方法中,稀释液虽可使用生理盐水或磷酸盐缓冲液,但在具体检验过程中建议使用磷酸盐缓冲溶液,因为磷酸盐缓冲溶液能更好地纠正食品样品中pH变化,对细菌具有更好的保护作用。
4.在进行样品的10倍稀释过程中,吸管应插入检样稀释液液面2.5厘米以下,取液应先高于1mL,而后将吸管尖端贴于试管内壁调整至1mL,这样操作不会有过多的液体黏附于管外。而后将1mL液体加入另一9mL试管内时应沿管壁加入,不要触及管内稀释液,以防吸管外部吸附的液体混入其中影响检测结果。
5.将1mL样品匀液或稀释液加入平皿内时应从平皿的侧面加入,不要将整个皿盖揭去,以防止污染。
6.倾碟后将检样与琼脂混合时,可将平皿底在平面上先向一个方向旋转3~5次,然后再向反方向旋转3~5次,以充分混匀。旋转过程中不应力度过大,避免琼脂飞溅到平皿上方。混匀过程也可使用自动平皿旋转仪进行。
7.本方法移液时可使用可连接吸管的电动移液器,在使用过程中,一旦液体进入电动移液滤膜中,应立即对滤膜进行更换,以防止污染。
8.当对易产生较大颗粒的样品(如肉类)进行检测时,建议使用带滤网均质袋,以方便均质后用吸管吸取匀液。
9.鉴于微量移液器移液头较短,为控制污染,在匀液移液过程中不应使用。
10.为保证对计数培养基高压灭菌的效果,建议每瓶培养基高压时,体积不宜超过400mL。
11.高压灭菌后,培养基中的琼脂往往会分层在底部,应摇匀后使用。
12.当样品中含有吸水性物质(如淀粉、面粉等)时,应以最速度进行琼脂倾碟,以防凝块产生。
13.在培养箱中为防止中间平皿过热,高度不得超过6个平血。
1
本方法所检出的菌落总数是否为单位食品中含有的真正细菌数量？
本方法所检出的菌落总数不是单位食品样品中含有的真正细菌数量。本方法所检测的菌落总数是指单位食品样品中能在需氧条件下,37℃培养48h±2h,在平板计数琼脂培养基上发育而形成能被肉眼识别的细菌集落的总数,主要包括能在所使用培养基中能发育生长的嗜中温、需氧和兼性厌氧的细苗,而不能满足生长条件的微生物,如厌氧或微需氧微生物、嗜冷生物、有特殊管养要求的微生物等均不在本方法的计数范围，对这些微生物的培养需要使用不同的营养(如特定的培养基)和培养条件(如温度、培养时间、pH、氧气浓度等去满足共要求。但在我国食品安全国家标准中,对不同种类食品中菌落总数的规定都是根据本标准方法确定的,故此在食品样品检时,无需关注这些微生物。此外,食品样品中的细菌细胞通常是以不规则的方式存在,如单个、成双、链状、萄状或成堆等形式,而食品样品前处理过程只是通过简单的机械处理,不能将食品样品中不同形式存在的细菌分成单个细胞,故此在培养基中出现的菌落可以来源于不同形式的细胞团块,也正是由于这个原因,本方法所得的菌落总数结果的数字不应报告活菌数,而应以单位食品样品内菌落形成单位数( colony Foming Units, CFU)报告。
2
为什么水产品与其他食品样品中菌落总数检测时所采样的培养条
件不同？
水产品产自海水或淡水,其中的温度较低,因而在制定水产品的食品安
全国家标准时选择了30℃士1℃进行培养,培养时间为72h士3h。
3
当高稀释度平板上的菌落总数反而比低浓度平板菌落数高时，如何处理？
当高稀释度平板上的菌落数反而比低稀释度平板上数高时,结果不可直接记录报告。应针对此结果进行原因分析,并对剩余样品进行重复实验，如确认结果如此,则表示样品中含有可影响菌落总数计数结果的抑菌物质,应使用稀释、中和剂、过滤等方式去除样品中的抑菌物质后再进行检别、报告。
4
当所有平板上都菌落密布时，结果如何报告？
当所有平板上都菌落密布时,也不应报告多不可计,而应在稀释度最高的两个平板上,分别任意取2cm2,计数其中的菌落数,计算每cm2的平均菌落数,来以平皿面积(如平皿直径为90mm,则乘以平皿面积63.6cm2),再乘以稀释倍数报告。
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方法中规定，每个平皿平板计数培养基的使用体积是15~20ml，培
养基体积变化是否会影响计数结果？
经过实验室验证,培养基体积在15~20mL范国内变化不会影响计数结果。
6
平板计数培养基的温度是否会影响计数结果？
经实验室验证,平板计数培养基的温度在45℃~50℃范围内变化,不会影响计数结果。
7
不同品牌的平板计数培养基的使用是否影响检验结果？
目前我国市场上常见培养基生产厂家有数十个,多生产干粉和即用型两
类培养基,鉴于不同厂家的培养基间的确存在一定差异,建议实验室应向培养基生产厂家索要依照GB4789.28-2013出具的第三方检验报告,或依照GB4789.28-2013,实验室做好验收工作。
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是否可以使用其他非选择性培养基替代平板计数培养基进行检验？
不可以。我国诸多类型的食品产品限量标准是参照平板计数培养基的计数结果制定的,如果使用其他非选择性培养基会影结果的判定
