金雀异黄素(GEN)是大豆异黄酮的主要活性成分,存在于富含豆肽的多种天然植物中,其分子结构与人体自身雌激素相同。来自黑龙江八一农垦大学食品学院的甄井龙、初晓丽和丛莎等人已通过动物实验证实GEN能调节青年雌性大鼠卵巢中激素水平,对卵巢颗粒细胞中的相关蛋白和基因如bcl-2、bax、P450 mRNA等具有调节作用。在此基础上,为了进一步研究GEN对青年雌性大鼠卵巢功能的调节作用和机制,选择了影响卵泡发育过程的雄激素生成关键酶作为研究目标,采用Western blot和实时荧光聚合酶链式反应(PCR)检测GEN对青年雌性大鼠卵巢组织中雄激素生成关键酶StAR、P450scc、CYP19蛋白及mRNA表达的影响,以期进一步探讨GEN调节卵巢功能的作用和机制。
1. 实验期间雌鼠体质量变化
实验期间雌鼠的体质量与NC组比较没有明显变化(P>0.05),实验结果与本课题组前期研究中GEN作用于雌鼠体质量结果一致。
2. 卵巢组织中StAR等的相对表达量
与NC组比较,各剂量组StAR、P450scc、CYP19 mRNA表达水平均升高,尤其以GEN的M组(mRNA相对表达量分别为2.731±1.348、2.691±1.229、3.348±1.715)、GEN H组(mRNA相对表达量分别为2.410±0.864、3.198±0.859、3.153±1.284)升高明显,均有显着性差异(P<0.05),与PC组效果相似。在GEN的作用下,卵巢内起到运转作用的StAR mRNA相对表达量增加,同时P450scc mRNA相对表达量也显着提高,作用于下游产物的酶基因CYP19 mRNA相对表达量也得到了提高,此过程没有雌雄激素生成相关基因的异常表达,推测GEN可能通过影响mRNA的表达来影响激素合成。
3. 大鼠卵巢StAR等蛋白表达情况
各组大鼠卵巢中StAR、P450scc蛋白的相对表达量均高于NC组,GEN H组StAR蛋白相对表达量(1.024±0.070)增加明显(P<0.05);GEN M组(0.608±0.033)和H组(0.953±0.053)的P450scc蛋白相对表达量增加,与NC组相比差异显着(P<0.05)。Western blot蛋白检测结果与mRNA表达相一致,表明GEN可以通过影响雄激素生成的关键酶基因及蛋白的表达来影响其生成。
结论
给予GEN后,与NC组相比,GEN中、高剂量组StAR、P450scc、CYP19 mRNA相对表达量显着增高(P<0.05)。卵巢内StAR、P450scc的蛋白检测结果显示:StAR表达量在GEN高剂量组增加明显(P<0.05);P450scc表达量在GEN中、高剂量组均增加明显,且与NC组相比差异显着(P<0.05)。得出结论为30~60 mg/kg的GEN可增强青年雌性大鼠体内雄激素生成关键酶的表达水平,影响卵泡的发育和成熟。