高效液相色谱(HPLC)是近30年发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。它既能用于微量组分的分析测定,又能用于大量的制备分离,灵活多样,其应用范围已超过其他各种分离方法,尤其在中药样品的分析分离方面更充分发挥它的特长,为推动该领域的进步和发展作出了巨大贡献。
根据用途和泵配置的不同,一般可以将常见的实验室级别LC分为以下几种:分析型高效液相色谱仪(HPLC),半制备液相色谱仪(Semi-Prep HPLC)和制备型高效液相色谱仪(Prep-HPLC)以及中压液相色谱仪(MPLC)。这三者的原理基本一样,不同之处主要在于泵的最大流速,一般而言,分析型HPLC的最大流速为10.00mL/min,半制备HPLC为50mL/min,制备HPLC为100mL/min,中压液相色谱更高。而由于泵流速的升高,流通池的光程、体积,管道的内径,六通阀、定量环等零件也会相应改变;并且,根据实验室的需要,可以增加自动接收器等配件。
我们了解了液相色谱仪和制备型液相色谱仪的不同点,那么问题来了,制备型高效液相色谱仪在什么领域里最常用?
目前,实验室级别的制备液相色谱主要用于以下领域:
1.天然药物化学、中药化学。这是国内目前最广泛的使用方法,为了弄清楚植物中的微量有效成分,开放手工色谱柱早已不够用了,几乎每个搞天然药化的实验室都至少有一台液相,土豪实验室人手一台液相。
2.蛋白纯化。相对于前者,蛋白纯化的起步要稍微晚一点,但是发展很迅速。同时,由于外国仪器厂家在这个领域的优势不算太大,目前国内也在这个领域加快发展,抢占地盘。
3.药物杂质纯化。由于合成工艺并不能做到100%的产率,往往伴有副产品,如何获得微量的杂质并确定结构和含量,这就得靠液相色谱。
4.手性化合物的制备。这个主要是有机合成和方法学的在用。
总之,目前有机化学领域里,开放手工柱层析依然是最常用的分离手段,也是每个有机狗必会的技能之一,其在未来很长一段时间里将仍然扮演重要的角色。制备液相已经在天然药化领域大面积使用,在将来,随着科研的需要和价格的下降,将会逐渐进入千家万户,最终跟旋蒸一样普及。