来自河北大学医学院的戎瑞雪、王中傲和李晓婵等人通过体外细胞培养的方法,进一步研究乳菇菌素D对多种不同组织来源的肿瘤细胞的抑制作用;并选取敏感肿瘤细胞株初步研究其抗肿瘤作用机制,为绒白乳菇的食药同源应用与开发提供参考依据。
1对不同组织来源肿瘤细胞的抑制作用
乳菇菌素D对A549、Bel-7402、SMMC7721和HeLa细胞的体外增殖有显着的抑制作用,其作用72 h的IC50分别为2.46、19.09、18.21、17.05 μg/mL,均小于20 μg/mL,而对HCT-8抑制作用较弱(IC50为137.26 μg/mL)。
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倒置显微镜观察对A549细胞形态的影响
乳菇菌素D作用后24 h,A549细胞连接开始消失、细胞变圆、脱落,随着作用时间的延长细胞脱落逐渐明显,至作用后48 h全部脱落,且细胞皱缩,体积变小,细胞浆内出现大量颗粒。
3瑞-姬氏染色光学显微镜下形态学变化
阴性对照组细胞,染成深蓝色或蓝紫色,色泽均一,胞膜完整;10 μg/mL乳菇菌素D组细胞,胞膜皱缩,染色质在核周聚集,细胞核固缩碎裂成数个圆形颗粒即界限分明的凋亡小体。
4乳菇菌素D对A549细胞凋亡的影响
1、10 、100 μg /mL 乳菇菌素D 作用于A 549 细胞72 h 后, 细胞凋亡率分别为( 10.43±2.32 )%、( 20.22±1.96 )%、(32.14±3.04)%,与阴性对照组的(4.98±0.59)%比较,凋亡率升高(P<0.01)。
5乳菇菌素D对A549细胞周期分布的影响
与阴性对照组相比,不同质量浓度的乳菇菌素D(100、10、1 μg/mL)作用于A549细胞72 h,S期细胞比例明显增多,G1期细胞比例明显减少,并且随乳菇菌素D剂量的增加,乳菇菌素D对A549细胞周期的影响增强。其中10、100 μg/mL剂量组变化明显,与阴性对照组相比,G1期、S期细胞比例差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结果表明乳菇菌素D使A549细胞主要阻滞于S期。
结 论
乳菇菌素D能够有效抑制A549、Bel-7402、SMMC7721和HeLa细胞的增殖,作用72 h后的IC50分别为2.46、19.09、18.21、17.05 μg/mL;乳菇菌素D可引起A549细胞显着的形态学改变,出现凋亡小体;诱导A549细胞凋亡(100 μg/mL作用72 h 时的凋亡率为32.14%)、使细胞阻滞于S期。结论:该化合物能够抑制多种组织来源的肿瘤细胞增殖,其中A549细胞最敏感;其作用机制是通过干扰细胞增殖周期而诱导肿瘤细胞凋亡。本实验为乳菇菌素D的开发提供实验依据。