来自延边大学附属医院的崔香丹、朱洁波和延边大学医学院的何鑫采用tBHP诱导血管内皮细胞氧化损伤模型，探讨BRPS对血管内皮细胞氧化损伤以及凋亡的抑制作用，旨在为草苁蓉的开发利用提供科学依据。
1BRPS对HUVEC的毒性
BRPS质量浓度小于等于100 mg/L时，HUVEC存活率均大于90%，与正常组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），不显示细胞毒性。因此，本研究选取100、50、25 mg/L作为BRPS干预剂量进行后续研究。
2BRPS对tBHP损伤HUVEC存活率的影响
与正常组比较，tBHP损伤组HUVEC存活率显着降低（P＜0.05），为（49.4±4.1）%；而BRPS 高、中和低剂量组HUVEC 存活率分别为（71.3±11.2）%、（60.8±7.3）%和（54.3±3.2）%，与损伤组比较升高44.3%、23.1%和9.9%，差异显着（P＜0.05）。提示BRPS预处理能抑制tBHP所致HUVEC氧化应激损伤。
3BRPS对tBHP损伤HUVEC ROS水平的影响
与正常组比较，损伤组细胞产生强绿色荧光，荧光强度增高44 倍，提示细胞内ROS水平升高；而BRPS高、中和低剂量组细胞则产生微弱绿色荧光，与损伤组比较荧光强度分别下降93.1%、82.2%和64.6%，差异显着（P＜0.05）；且随BRPS质量浓度的升高，荧光强度呈减弱趋势；提示BRPS预处理降低细胞内ROS水平。
4BRPS对HUVEC MDA、GSH、SOD水平的影响
与正常组比较，损伤组内皮细胞SOD活力和GSH含量显着降低（P＜0.05），MDA水平显着升高（P＜0.05）；与损伤组比较，BRPS组内皮细胞SOD活力与GSH含量显着升高（P＜0.05），MDA水平显着降低（P＜0.05），提示BRPS预处理可上调HUVEC抗氧化防御能力。
5BRPS对HUVEC ΔΨm的影响
与正常组比较，损伤组内皮细胞ΔΨm降低；与损伤组比较，BRPS组细胞ΔΨm增高，随BRPS剂量的升高，红色荧光呈增强趋势；绿色荧光呈减弱趋势；提示BRPS抑制tBHP所致HUVEC ΔΨm的下降。
6HUVEC Hoechst33342染色结果
正常组细胞蓝色荧光弱，染色均匀弥散，细胞数量较多。损伤组细胞荧光强，细胞数量明显减少，可见细胞核发生固缩、核内呈颗粒状明亮蓝色荧光，出现明显凋亡特征。BRPS组细胞核内颗粒状明亮蓝色荧光呈逐渐减弱趋势，大部分细胞蓝色荧光均匀弥散，接近正常组细胞特征。
7BRPS对HUVEC凋亡的影响
正常组几乎看不到凋亡细胞；损伤组部分细胞出现核固缩等早期凋亡特征，与正常组比较，凋亡细胞明显增多；与损伤组比较，BRPS组凋亡细胞明显减少，BRPS高、中和低剂量组荧光强度分别下降59.1%、46.9%和32.5%，差异显着（P＜0.05）；且随BRPS剂量的升高呈递减趋势。提示BRPS抑制tBHP所致HUVEC凋亡。
8BRPS对HUVEC Caspase活化的影响
与正常组比较，损伤组细胞Caspase活化片段Cleaved caspase3（Cleaved c3）、Cleaved caspase（Cleaved c8）和Cleaved caspase9（Cleaved c9）表达显着升高（P＜0.05），分别为正常组的2.8、2.1 倍和3.0 倍；与损伤组比较，BRPS组细胞Caspase活化片段Cleaved c3、Cleaved c8、Cleaved c9表达显着降低（P＜0.05），其中BRPS高剂量组中各活化片段的表达分别下降70.6%、45.9%和47.2%，提示BRPS抑制tBHP所致HUVEC Caspase的活化，从而抑制HUVEC凋亡。
9BRPS对HUVEC胞浆Cyt c蛋白表达的影响
与正常组比较，损伤组HUVEC胞浆Cytc蛋白水平显着升高（P＜0.05），为正常组的5.4 倍；与损伤组比较，BRPS组HUVEC胞浆Cyt c蛋白水平显着下降（P＜0.05），BRPS高、中和低剂量组中分别下降71.4%、69.4%和22.4%；提示BRPS减少tBHP所致HUVEC线粒体Cyt c的释放，抑制Caspase依赖的HUVEC凋亡。
10BRPS对HUVEC Bcl-2、Bax和Bid蛋白表达的影响
与正常组比较，损伤组细胞Bax蛋白表达上调1.5 倍，Bcl-2蛋白表达下调0.5 倍，Bax/Bcl-2比值升高2.8 倍，线粒体tBid水平升高1.1 倍，差异均显着（P＜0.05）；与损伤组比较，BRPS高、中和低剂量组细胞Bax相对表达量分别降低57.1%、44.3%和19.0%，Bcl-2相对表达量分别升高136.4%、27.3%和9.1%，Bax/Bcl-2比值分别下降81.9%、56.3%和25.8%，线粒体tBid水平分别下降45.5%、44.5%和36.4%，差异显着（P＜0.05），提示BRPS可通过阻止Bid活化以及降低Bax/Bcl-2比值而抑制HUVEC凋亡。
结 论
BRPS提高tBHP损伤的内皮细胞存活率，降低细胞ROS水平，减少MDA生成，提高SOD活性与GSH水平，升高ΔΨm水平，抑制细胞凋亡。Western blot结果显示，BRPS降低胞浆Cyt c、线粒体tBid水平，减小细胞Bax/Bcl-2比值，抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。结论：BRPS对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡具有抑制作用，机制可能与线粒体凋亡途径和死亡受体途径均有关。
