样品的处理方法：发酵完成后，发酵液用等体积的乙酸乙酯萃取 3 次。合并乙酸乙酯萃取液，进行减压干燥，再用 1 mL 甲醇将粗提物进行溶解，经过 0.22 μm 有机相微孔滤膜过滤后，供 HPLC 和 LC-MS 分析使用。大量发酵的方法：发酵种子制备同上，发酵时使用 500 mL 的三角弹簧瓶，每瓶装 100 mL 的发酵培养基，发酵总体积为 5 L。于 220 r/min、30 °C 培养 7 d。发酵完成后，使用等体积的乙酸乙酯萃取 3 次，减压干燥，得到粗提物约 10 g。
使用 HPLC 检测各菌株发酵产物次生代谢产物的差异情况，分析流动相为：乙腈-水(2‰的乙酸)，流速：0.6 mL/min，均采用全波长扫描。HPLC 洗脱条件： 0–40 min ： 10%–50% 乙腈梯度， 40–50 min：50%–75%乙腈梯度，50–60 min： 75%–100%乙腈梯度，60–68 min：纯乙腈洗脱， 70–90 min：10%乙腈平衡柱子。色谱柱为：分析柱为 Agilent 5 TC-C18(2) 250 mm×4.6 mm，SN： 588925-902，PN：509550。进样体积为 10 μL。
利用 10 g的60–100目层析硅胶将制备好的粗提物进行拌样。然后，使用 60 g 的 200–300 目层析硅胶进行干法装柱，层析柱的规格为：4 cm×60 cm。待上样完成后，使用三氯甲烷-甲醇为洗脱剂进行梯度洗脱。首先使用500 mL 的氯仿进行洗脱，再逐渐增加洗脱剂中甲醇的比例，当洗脱剂中氯仿: 甲醇的比例为20∶1 时(洗脱体积为 1.5 L)，利用 HPLC 检测该组分，发现了一个化合物与?PKS-3 发酵样品中所缺少的化合物的保留时间和特征吸收波长均一致，该份样品命名为SF1。当洗脱剂氯仿:甲醇的比例为 10∶1 时(洗脱体积为 1.2 L)，将洗脱下来的组分利用HPLC 检测，发现含有 ?PKS-9 中缺少的化合物，该份样品命名为SF2。
接下来，将含有目标化合物的两份样品，分别使用 Sephadex LH-20 进行凝胶过滤色谱纯化 (色谱柱规格为 1.8 cm×160 cm)，洗脱剂为甲醇，流速为 6–8 d/min，然后，分别将含有目标化合物的样品进行减压干燥后，继续分离纯化。其中，SF1 组分利用正相硅胶柱层析(色谱柱规格为 1.5 cm×50 cm)，装柱硅胶为 18.5 g，洗脱剂为石油醚：丙酮=85：15，分别收集洗脱组分，将含有较纯化合物的组分进行减压干燥，最终得到化合物 SF1 的纯品约 100 mg。SF2 组分再利用正相硅胶柱层析(色谱柱规格为 1.5 cm×50 cm)，装柱硅胶为 15.0 g，利用氯仿：甲醇=10：1 进行洗脱，将含有较纯的目标化合物组分进行减压干燥，最终得到化合物 SF2 的纯品为 20 mg。
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