2．接种环或接种针每次使用前后，均须火焰灭菌。即在乙醇灯火焰上彻底烧灼1 次，金属棒或玻璃棒部分亦须转动着通过火焰3 次，用后烧灼时，先将近环处镍丝置于火焰中，使热导向接种环，如直接将环烧灼，则环上残余菌液可因突然受高热而爆烈四溅，有传染危险。待环上菌液蒸发干涸后，再将接种环以垂直方向于火焰中烧灼灭菌，最后再将金属棒或玻璃棒部分往复通过火焰。接种针用后灭菌时与接种环同。
3．接种环（针）经火焰后，需待冷却后再沾取标本或放置于工作台上，以防烫死微生物和烧损桌面。
4．由培养基或试管培养物中沾取标本时，培养瓶口、试管口在打开后及关闭前，应于火焰上通过1 ～2 次，以杀死可能从空气中落入的杂菌和由培养物而来的致病菌。打开瓶塞或试管塞时，应将棉塞上端夹于手指间适当的位置，不得将棉塞任意放置别处。
5．不染色标本和染色标本观察后，应立即投入消毒液内灭菌。
6．使用过玻片，务须彻底消除玻片上的染色细菌后再用，否则再次使用时可能做出错误诊断。
