我们已经评估了API 50CHB系统对白色芽孢杆菌幼虫的鉴定和生物化学表征的适用性，白色芽孢杆菌幼虫是美洲幼虫腐臭病的病原体，这是蜜蜂的一种重要疾病。 使用该系统测定了29个在几个地理区域从美国幼虫腐臭病暴发中分离的B幼虫株。 所有菌株都显示出与核糖，D-葡萄糖，D-甘露糖，N-乙酰葡糖胺，海藻糖和塔格糖的阳性反应（产酸）。 除甘油之外，其余所有甘油均呈阳性反应; 用柳醇葡和5-酮葡糖酸盐观察到可变结果。 只有一种菌株酸化了D-果糖和半乳糖。
幼虫芽孢杆菌是美国幼虫腐臭病的病原体，是意大利蜜蜂中最严重和最普遍的细菌病。 感染影响幼虫阶段，很容易通过细菌的抗性孢子传播。
常见的养蜂实践增加了孢子从菌落转移到菌落的频率。 致病因子在养蜂设备和活菌群中作为孢子的持久性使得任何技术或化学治疗无法完全恢复，感染迟早会重新出现。 与设备杀菌技术，严格的兽医措施一起应用于控制美国幼虫腐臭病。
作为一个相当典型的症状学，美国幼虫腐臭病的临床诊断通常并不困难。 此外，通过细菌学检测来寻找病原体的原因在于，白色芽孢杆菌幼虫几乎总是在纯培养的幼虫体内发育。
除了临床病例外，可以在预防的基础上对可能被孢子污染的材料进行白色芽孢杆菌幼虫孢子的搜索，因此可能成为潜在的感染源，为蜂蜜创建了特别的测试程序。有关该主题的文献通过培育和生化测试为B幼虫的分离和正确鉴定提供了充分的信息。在用于鉴定芽孢杆菌属物种的生物化学性状中，碳水化合物产酸起着重要的诊断作用。关于B幼虫，生物信息可用于大约20种碳水化合物。
作为鉴定芽孢杆菌种的传统微生物方法的替代方法，API系统的使用已经变得普遍。 除了快速执行外，该系统还具有重现性高的优点。 该系统涉及测定49种碳水化合物和衍生物（API 50CHB试剂条）的代谢，以及12种酶促测试（API 20E试剂条）。Logan和Berkeley（1984）利用这一系统对芽孢杆菌属进行了有机鉴定，并描述了所有的代表性物种，但少数包括芽孢杆菌幼虫。
我们的研究基于API 50 CHB系统，作为确定B幼虫使用各种碳水化合物及其衍生物的能力的快速方法。 我们的目的是在诊断和生物化学特征水平上为扩大信息做出贡献。
材料和方法
培养
我们使用菌株ATCC 9545作为参考，检查了29种B幼虫菌株。 标记为1066,1090,1104的菌株由Jelinsky博士（波兰Swarzedz兽医研究所有用昆虫疾病研究部门）提供; 菌株42A，620,757由VDrobníková博士（捷克斯洛伐克Dol养蜂研究所）提供。其余的在过去的12年中，从意大利各地的17只感染的幼虫梳子中分离出来。
我们用Michael的培养基来维持和增长。 其组成如下：酵母提取物10g; 新蛋白胨10g; 硫胺素0.1mg; 琼脂，15克; 蒸馏水，1 000 ml; pH 6.8。 培养物在36℃有氧条件下进行各种测试。
隔离和识别
将具有美国幼虫腐臭病视觉特征的子脾中的幼虫分解，直接在载玻片上划线以用于孢子的显微镜检查（相差400倍，或用亚甲蓝染色后浸没1000倍）。 在生理溶液中稀释后，在基础培养基上进行第二次条纹。 在有氧孵育2-3天后，我们检查了分离的菌落。 它们发白，不透明，变平，边缘不规则，直径通常为1-3毫米。 显微镜检查突出显示宽度小于1μm的革兰氏阳性棒。 这些培养物进行如下所示的进一步鉴定试验。
过氧化氢酶
将1毫升3％的过氧化氢加入到在基础培养基斜面上生长的24小时培养物中。 在1分钟内检查该反应（通过形成气泡指示阳性反应）。
在20和40°C时生长
将24小时的培养物接种在基础培养基的斜面上并在20℃和40℃温育。 数据收集24小时后开始并持续至第14天。
在含有5％NaCl的培养基中生长
将24小时培养物的小环接种到液体基础培养基（没有迈克尔培养基）中
加入琼脂）加5％NaCl。 数据收集开始
24小时后继续第14天。
酪蛋白水解
用于该试验的培养基由以下组成：溶液A，10g脱脂奶粉和90ml蒸馏水; 溶液B，3g琼脂和97ml蒸馏水。 将两种溶液分别灭菌（121℃20分钟），在双锅炉中加热至45℃，然后混合。 将如此制备的培养基（25ml）倒入陪替氏培养皿中，然后接种24小时培养物。 孵育持续7天。 通过澄清菌落生长区域下方和周围的培养基来表明阳性反应。
淀粉水解
我们使用含有1％可溶性淀粉的迈克尔培养基并倒入培养皿中。 在接种和孵育3-5天后，开始生长时，培养基表面充满1:5稀释的碘化卢戈溶液。通过在菌落生长的区域周围形成无色晕来表明阳性反应。 所有的孤立培养物都显示出与B幼虫有关的特征。
过氧化氢酶：阴性
在20°C时生长：阴性
在40°C时生长：正面
在5％NaCl中生长：阴性
酪蛋白水解：阳性
淀粉水解：阴性
碳水化合物酸化
我们使用的API 50CHB系统。该系统包括条和接种介质。每条带由50个微管组成。一个管作为对照，而其他管包含具有碳水化合物及其衍生物（异糖苷，多元醇，糖醛酸）的底物。
遵循系统附带的制造商说明书并且迈克尔培养基用于微生物生长。
对于每种菌株，将2条接种在API 50CHB培养基中的细菌悬浮液，其密度等于McFarland规模的管n = 2。按照该系统的要求，我们在24小时进行了第一次读数，并在48小时进行了确定性的读数。接种培养基中酚红的目测检查结果表明观察到的反应强度为1至3。非常弱的反应被认为是负面的。我们使用B alvei菌株ATCC 6344作为系统的质量控制。为了检查初始结果的一致性，重复每个测试。没有使用完成API 50CHB系统的API 20E系统，因为初步测试的结果不显着，因为获得的阳性结果很少。
结果与讨论
来自白色芽孢杆菌幼虫菌株ATCC 6344的对照试验的结果反映了API系统附带的识别图中指示的该物种的平均谱。 以下碳水化合物被酸化：甘油，核糖，阿糖醇，半乳糖，D-葡萄糖，肌醇，α-甲基-D-葡糖苷，N-乙酰葡糖胺，苦杏仁苷，熊果苷，七叶素，水杨苷，纤维二糖，麦芽糖，蜜二糖，蔗糖，海藻糖，松三糖，D-棉子糖，淀粉，β-龙胆二糖和杜丹酮糖。
检查的B幼虫菌株酸化了有限数量的底物并产生不同的着色强度（表I）。 对于未列入表I的所有基质，反应均为阴性。
当获得的特征与其他物种描述的特征比较时，它具有足够的区分性，因此可用于鉴定B幼虫。
但是，应该记住，后者是使用传统的宏观方法获得的。部分底物出现部分差异：木糖，半乳糖，果糖，甘露糖醇和蔗糖。至于木糖，我们的数据与Jelinski（1985b）的研究结果一致，他们对110个菌株的研究发现，没有菌株能酸化该底物。另一方面，Azuma和Kitaoka（1965）报道了12个结果中的11个结果，但仅在很长时间才结束。在我们的测试中，半乳糖和果糖各自仅被一种菌株酸化。 Jelinski（1985b）没有注意到这两种碳水化合物的任何积极结果，但是Azuma和Kitaoka（1965）观察到一个出现很慢的积极反应。 Furowicz和Zahaczewska（1972）也报道了从半乳糖生产酸。甘露醇的酸化是可变的;我们总是发现它是负面的。在Jelinski的测试中（1985a，b），17％的病例呈阳性，而Azuma和Kitaoka（1965）则报告只有负面数据。 Furowicz和Zahaczewska（1972）总是正面的，Gordon等人（1973）是变化的。最后，对于蔗糖，我们的数据与Jelinkski's（1985b）完全一致，部分与Azuma和Kitaoka（1965）的观察者观察到在12种中有5种菌株酸化，但在这里也非常缓慢。
总之，我们发现B类幼虫使用API 50CHB系统的生化特征与同属的其他物种相比具有充分的区分性。 应该注意鉴别B幼虫最有价值的底物：果糖（几乎总是阴性），七叶素（阴性），Dtagatose（阳性）。 事实上，这3种碳水化合物的总体反应似乎足以能够正确鉴定B幼虫。 根据碳水化合物酸化的变化，API 50CHB系统还可用于B幼虫株的生物化学表征。
