来自广东产品质量监督检验研究院的陈晓鹏、綦艳和广州大学化学化工学院食品系的顾采琴等人将QuEChERS技术应用于样品前处理，结合超高效液相色谱-串联质谱，建立牛奶和奶粉中42 种类固醇激素残留量的检测方法，该方法简单、快速、准确。
1.色谱条件的优化
结果表明，流动相含有乙酸铵和体积分数过高的甲酸，反而会影响离子化效率，降低响应值，而乙腈-0.1%甲酸溶液流动相体系能提供最佳离子化条件，峰面积信号最强，灵敏度最高，符合以上结论。
2.质谱条件的确定
在电喷雾质谱、正离子监测模式下，分5 组将质量浓度为1 μg/mL的类固醇激素混合标准溶液以5 μL/min的流速直接注入质谱仪中进行一级质谱扫描，分别优化毛细管电压、锥孔电压、离子源温度、脱溶剂温度和流量获得各种化合物的母离子峰[M＋H]＋。
3.前处理条件的优化
3.1 提取溶剂的优化
0.1%甲酸-乙腈作为提取溶剂的加标回收率稍高于乙腈，且提取效果优于后者。
3.2 净化填料的优化
由于PSA、C18和中性氧化铝3 种净化填料，使用量少则达不到净化要求，使用量大则产生吸附，影响回收率，因此本实验考察各种填料的最佳使用量，最终采用50 mg C18、100 mg PSA、300 mg中性氧化铝和300 mg无水硫酸镁的组合方案进行净化，结果显示，样品溶液澄清、基质干扰小，回收率佳。
3.3 定容液的优化
当定容液随着乙腈体积分数的升高，峰形逐渐变差，分离度下降。当乙腈体积分数为40%时，42 种激素的响应值最高，而且峰形优异，最终确定其为本方法的定容液。
3.4 基质效应的消除
乳制品尽管经过乙腈沉淀蛋白、分散固相萃取后得到良好的净化效果，但仍然无法完全消除其基质效应。为保证最终结果的准确可靠，有必要引入基质匹配标准溶液的方法，尽可能降低基质效应造成的影响。
4.方法验证
4.1 专属性分析
取市售空白基质奶粉，该试样除了含有内源性黄体酮外，并未检出其他干扰性成分，作为空白样品，加标回收计算时应减去相应本底空白值。42 种类固醇激素分布在1～9 min之内，分离良好。
4.2 线性和检出限
42 种待测物的线性相关系数均大于0.99，表明各目标化合物在1～500 μg/L范围内呈良好的线性关系。在空白奶粉和牛奶样品中添加一定质量浓度的混合标准溶液，将标准溶液与空白样品混合均匀后，按本研究建立的方法进行检测，以信噪比大于或等于10确定奶粉中各化合物的定量限（LOQ）为0.5～4.5 μg/kg，以信噪比大于或等于3确定各化合物的检出限（LOD）为0.15～1.5 μg/kg；牛奶中各化合物的LOQ为0.2～1.8 μg/kg，LOD为0.06～0.5 μg/kg。
4.3 回收率和精密度实验结果
奶粉中42 种类固醇激素的加标回收率在70.7%～117.7%之间，相对标准偏差在0.7%～14.7%之间；牛奶的加标回收率在70.3%～118.1%之间，相对标准偏差在0.6%～13.9%之间。两种基质的平均加标回收率在70%～120%之间，相对标准偏差均不超过15%。结果表明本方法具有良好的准确度和精密度，符合分析要求。
5.实际样品的测定结果
结果显示，48 个乳制品中除了黄体酮外均未检出其他41 种类固醇激素。奶粉中黄体酮的检出含量为0.6～23.8 μg/kg，检出率为95.8%；牛奶中黄体酮的检出含量为0.3～0.8 μg/kg，检出率为20.8%。
结 论
样品用0.1%甲酸-乙腈提取，无水硫酸镁和氯化钠盐析，离心后经50 mg十八烷基硅烷（C18）、100 mg乙二胺-N-丙基硅烷（PSA）和300 mg中性氧化铝（Al2O3-N）净化，40%乙腈溶液复溶，使用Waters ACQUITYUPLC? BEH C18色谱柱分离，以乙腈和0.1%甲酸溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾-正离子多反应监测模式，基质匹配外标法定量。在0.5～500 μg/L的质量浓度范围内，42 种类固醇激素的相关系数均大于0.99，该方法的检出限在0.06～1.5 μg/kg之间。在牛奶和奶粉中分别进行3 个水平添加实验（n=6），42 种类固醇激素的回收率为70.3%～118.1%，相对标准偏差为0.6%～14.7%。本方法简单快速、准确度好、精密度高，适合于牛奶和奶粉中42 种类固醇激素残留量的同时检测。
