来自天津商业大学生物技术与食品科学学院的王秋萍、河北一然生物科技有限公司的贾彦和曹江鸣等人主要从炎症因子和信号通路两方面入手，以结肠癌HT-29细胞为研究对象，探究乳源CGMP的抗炎性能和免疫调节作用。通过免疫荧光法确定LPS刺激HT-29细胞激活NF-κB信号通路，确定乳源CGMP通过抑制炎症因子和血管生成因子的表达，从而达到减缓炎症的程度，更为乳源CGMP作为功能性物质应用于结肠的健康提供一定的科学依据。
1.免疫荧光法确定LPS刺激HT-29细胞激活NF-κB信号通路
由免疫荧光检测发现，在正常对照组中，可清晰地看到呈现红色荧光的细胞质，中间内依稀可见空心的部分为细胞核，通过与细胞核的蓝色荧光染色叠加后，发现细胞核的颜色与叠加前几乎无差别，说明NF-κB（p65）没有发生核移位。而通过观察经LPS刺激后的各组叠加后的图片，发现出现了p65从细胞质内不同程度地转移到细胞核内的现象。LPS组1叠加图的胞核区染色不再是单一的蓝色，伴随轻微的紫色，原因是NF-κB的核移位使得细胞核内也表现出红色荧光，当红、蓝颜色叠加后，便出现了蓝紫色。NF-κB活化的程度越大，即核移位越多，胞核区的染色就越向紫色偏移，比较LPS组1～组4，发现LPS组3的胞核区叠加后的紫色更明显，表明胞核内的红色荧光更多；所以，LPS组3（1 μg/mL）是刺激HT-29细胞活化NF-κB信号通路的最适剂量。在此基础上继续考察了乳源CGMP对炎症因子和血管生成因子表达的影响。
2.乳源CGMP对炎症因子和血管生成因子表达的影响
2.1 乳源CGMP干预激活后的HT-29细胞的8种炎症因子表达水平
采用ELISA试剂盒的方法测定细胞中炎症因子相对表达量的结果：其中表达量相对较多的是GMCSF、GCSF、INF-γ、TNF-α、IL-8 5 种因子，剩余3 种因子的表达量一般。LPS组各种因子都明显高于对照组和乳源CGMP组。同时综合8 种因子经乳源CGMP的调节后，发现CGMP组2、CGMP组3和CGMP组4的对炎症因子表达有明显的影响。
2.2 乳源CGMP干预激活后的HT-29细胞的8 种血管生成因子表达水平
采用ELISA的方法测定的细胞中血管生成因子相对表达结果：发现血管内皮生长因子（VEGF）与转化生长因子（TGF）β表达量最突出，乳源CGMP组不仅极显着地下调了LPS刺激后的VEGF分泌，其表达量也低于正常对照组，具有极显着性差异。其余的因子也呈现出LPS组的表达量最大，乳源CGMP均不同程度地抑制了各种因子的表达，总体趋势均是先降低后升高。
结 论
1 μg/mL的LPS能显着激活NF-κB信号通路，p65的核移位达到最佳水平；不同质量浓度的乳源CGMP均可不同程度地抑制HT-29细胞炎症因子和血管生成因子的表达水平。因此，乳源CGMP能够显着调节激活后的NF-κB信号通路，并有效抑制和改善结肠癌细胞的炎症状态，其机制为乳源CGMP通过有效抑制炎症因子和血管生成因子的表达，从而减缓结肠癌细胞的炎症程度。
