长链碱又称鞘氨醇碱基、鞘氨基醇，为长链多羟基脂肪胺，是鞘脂类的特征性结构。来自海南大学食品学院的于曼曼、夏光华和李川等人以罗非鱼头为原料，制备纯化的TH-LCB，以人白血病K562细胞为细胞模型，初步探讨了不同质量浓度TH-LCB对K562细胞的增殖活性、细胞周期、细胞凋亡率及Caspse-3蛋白表达量的影响，为开发靶向治疗白血病的天然抗肿瘤药物提供理论依据。
1. 罗非鱼头不同极性脂质的分离及薄层检识结果
罗非鱼头不同极性脂质在碘蒸气下显色的结果：沿着薄层板，极性大的组分3保留在原点，极性较大的组分2靠近原点，极性小或无极性的组分1迁移距离相对较大。经过硅胶柱层析，不同极性的罗非鱼头脂质分离效果较好。组分2的检识结果：组分2在莫氏试剂显色下呈红紫色斑点。因为糖基在浓硫酸作用下，脱水生成糠醛及糠醛衍生物，后者能与α-萘酚（莫氏试剂）生成紫红色物质。因此可以判断组分2是糖脂，可以用于后续的研究。
2. TH-LCB的硅胶柱层析及薄层色谱检识结果
洗脱时间为10 min，出峰时间为1.0～4.5 min。收集紫外检测器下的洗脱峰即脱除部分杂质的TH-LCB组分。洗脱的杂质可能是脑苷脂水解不完全而产生的神经酰胺以及TH-LCB与糖结合产生的产物。TH-LCB采用薄层层析检识，显色结果为紫红色斑点，其比移值为0.32。特征显色结果表明TH-LCB为鞘氨醇类化合物。另外，茚三酮显色结果表明，紫红色斑点清晰，无其他斑点，说明制备TH-LCB纯度较高，杂质较少，糖脂水解完全。
3. TH-LCB对K562细胞形态的影响
正常对照组K562细胞生长状态良好，边缘光滑清晰，细胞透明、大小均一，细胞核完整均匀；细胞经不同质量浓度TH-LCB作用24 h后，K562的生长增殖受到抑制，细胞密度明显减少，细胞形态大小不一，发生了明显的形态改变，细胞碎片增多，碎片呈小片状。当TH-LCB的质量浓度为50 μg/mL时，细胞生长增殖被显着抑制，细胞形态发生明显的变化。
4. TH-LCB对K562细胞增殖的抑制作用
随着TH-LCB质量浓度的增加，细胞增殖受到显着抑制，呈明显的剂量依赖效应。TH-LCB作用于K562细胞24 h和48 h后的IC50分别为42.207、39.494 μg/mL。MTT测定结果表明，TH-LCB显着地抑制细胞增殖活性。
5. TH-LCB诱导K562细胞凋亡
早期凋亡细胞指Annexin-PE（＋）和Dead Cell Marker（－）的细胞群；晚期凋亡细胞是指Annexin-PE（＋）和Dead Cell Marker（＋）的细胞群；总凋亡率为早期凋亡率与晚期凋亡率的总和。结果表明，TH-LCB显着增加K562细胞的凋亡率，呈剂量依赖效应。当TH-LCB为25 μg/mL时，细胞凋亡主要是早期凋亡，随着TH-LCB质量浓度的增加，晚期凋亡的细胞群也逐渐增加，总凋亡率也逐渐增加。当TH-LCB质量浓度达到100 μg/mL时，细胞几乎全部凋亡。流式细胞仪的结果表明：TH-LCB抑制K562细胞的增殖是通过诱导细胞凋亡实现的。另外，当TH-LCB质量浓度高时，K562细胞存活率较低，细胞碎片化程度高，会影响流式细胞仪的检测结果。
6. TH-LCB对K562细胞周期的影响
随着TH-LCB质量浓度的增加，sub-G0/G1（凋亡峰）呈上升趋势，且S期的细胞群逐渐减少。细胞周期结果表明TH-LCB可以诱导K562细胞的凋亡。
7. TH-LCB对Caspase-3蛋白表达量的影响
0、25、50、100、200 μg/mL TH-LCB处理K562细胞24 h后，细胞内促凋亡蛋白Caspase-3的表达量极显着升高（P＜0.01），呈剂量依赖性。进一步证明TH-LCB对K562细胞具有凋亡诱导作用。
结 论
TH-LCB可显着抑制人K562细胞的增殖，TH-LCB作用24、48 h后的半数抑制浓度分别为42.207、39.494 μg/mL；随着TH-LCB质量浓度的增加，细胞凋亡率逐渐增加，sub-G0/G1峰（凋亡峰）也随之升高，表明TH-LCB通过诱导细胞凋亡来抑制K562细胞增殖；Western blot结果表明，TH-LCB可提高细胞内Caspase-3的蛋白表达量，呈剂量依赖效应。结论：TH-LCB可通过诱导K562细胞凋亡抑制其增殖，这一过程可能与Caspase-3的激活有关。
