来自天津科技大学食品工程与生物技术学院的韩丽荣、魏硕名和王旭锋等人以小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）法、细胞染色法、相关酶活力的测定以及关键蛋白酶等方法，研究DHA的免疫调节活性，这将为DHA在食品和保健品中的应用提供科学依据。
1.DHA增殖和吞噬活性实验结果
DHA对RAW264.7增殖活性的影响
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不同质量浓度的DHA与细胞共培养24 h后细胞的增殖能力均有所增加，但其对应质量浓度的增殖能力均小于共培养48 h后的增殖能力。阳性对照组中，经过LPS处理细胞后，细胞增殖能力增加最显着，说明RAW264.7细胞处于正常可被激活的状态。共同培养48 h后的细胞，在给药800 ng/mL时，增殖能力达到顶峰，细胞增殖率为73.03%；在1 000 ng/mL时，细胞增殖能力有所下降，但同空白对照组相比，细胞仍表现为增殖作用。共培养72 h后的细胞，由于细胞营养条件的限制，随着作用剂量的增加，细胞数量增幅较小。
在实验范围内，DHA与RAW264.7细胞的最佳作用时间为48 h，最佳作用剂量为800 ng/mL，因此后续实验选定DHA的作用时间为48 h。
DHA对RAW264.7吞噬活性的影响
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当DHA质量浓度为800 ng/mL时，RAW264.7细胞吞噬活性最高。中性红吞噬实验初步说明DHA能够激活RAW264.7细胞，通过提高巨噬细胞的吞噬能力来发挥DHA的免疫活性，执行各种免疫防御功能，且在一定的质量浓度范围（0～1 000 ng/mL）内，RAW264.7细胞的吞噬活性与DHA具有明显的剂量依赖关系。
2.DHA对RAW264.7细胞形态的影响
扫描电子显微镜观察结果
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以800 ng/mL的DHA作用细胞48 h后，细胞体积增大，表面突起明显，贴壁面积明显增大，褶皱增加，并有部分伪足出现；而空白对照未经激活的细胞体积较小，形状规则，细胞表面突起较小。以上结果表明RAW264.7细胞在800 ng/mL的DHA作用下，外部形态已呈现明显的活化特征。
AO染色结果
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对照组细胞处于静息状态，细胞呈圆形，形状规则、大小均匀、体积较小，DHA作用组细胞体积变大、数目增多，细胞核区的绿色荧光亮度增强，说明在DHA作用下，RAW264.7细胞被激活，细胞核酸代谢旺盛。
糖原PAS染色结果
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细胞质中的糖原经DHA作用后被染成紫红色，与对照组细胞相比，DHA作用组细胞的细胞质染色加深，细胞总数明显增多，细胞形态进一步分化，不规则程度加深。当DHA质量浓度为600 ng/mL时，细胞内糖原被紫红色浓染，表明细胞内糖原代谢加快；当DHA质量浓度为800 ng/mL时，视野内梭形细胞聚集，细胞数量进一步增多。以上结果表明，DHA能通过促进RAW264.7细胞内糖原代谢加快细胞的分化。
3. DHA对RAW264.7细胞酶活性的影响
DHA对RAW264.7细胞ACP活性的影响
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与对照组相比，当400 ng/mL DHA作用于RAW264.7细胞48 h后，细胞内ACP活力极显着升高，继续增加DHA的质量浓度，细胞ACP活力也随之增强。当DHA质量浓度为800 ng/mL时，ACP活力达到最大值123 U/g pro，是对照组酶活力的2.20 倍。以上结果表明，DHA能促进RAW264.7细胞分泌ACP，提高细胞的吞噬、杀菌能力。
DHA对RAW264.7细胞LSZ活性的影响
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与对照组相比，各剂量组RAW264.7细胞的溶菌酶活力极显着增强，在作用质量浓度为400～800 ng/mL的范围内，细胞中溶菌酶的活力随DHA作用质量浓度的增加而增加，呈现明显的质量浓度依赖性，并在800 ng/mL时活力达到最大值。以上结果表明，DHA能促进RAW264.7细胞产生溶菌酶。
DHA对RAW264.7细胞SOD活性的影响
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在实验剂量下，DHA可以刺激RAW264.7细胞，使细胞SOD活力与对照组相比呈极显着增强，当质量浓度在400～800 ng/mL范围内时，作用效果具有剂量依赖，细胞代谢能力随着作用剂量的增加逐步提高，细胞处于活化状态。
4.DHA对RAW264.7细胞MAPKs相关蛋白的影响
正常细胞组中，ERK1/2蛋白磷酸化程度较低，而p38和JNK蛋白磷酸化程度很低。使用600～800 ng/mL的DHA单独诱导巨噬细胞，可以发现，ERK1/2、p38和JNK的磷酸化程度明显升高，并且在800 ng/mL时磷酸化程度最高，到1 000 ng/mL时出现了下降。结果表明：DHA能够引起ERK1/2、p38和JNK出现一定程度的磷酸化，说明DHA诱导巨噬细胞激活部分依赖了MAPKs信号转导通路。
结 论
当DHA质量浓度为800 ng/mL，作用48 h时，RAW264.7细胞增殖率达到最大值，为73.03%。中性红实验结果表明DHA可以显着增强RAW264.7细胞的吞噬活性。扫描电子显微镜结果显示DHA具有促进RAW264.7细胞活化的作用；吖啶橙染色结果表明在DHA作用下，细胞核酸代谢旺盛，RAW264.7细胞被激活；糖原染色结果表明DHA能通过促进RAW264.7细胞内糖原代谢加快细胞的分化。通过对RAW264.7细胞中相关酶活力的测定，结果表明DHA能够显着提高酸性磷酸酶、溶菌酶和超氧化物歧化酶的活力。丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs） 蛋白通路结果表明：DHA能够引起细胞外信号调节激酶1/2、p38和应激活化蛋白激酶出现一定程度的磷酸化，说明DHA诱导巨噬细胞激活部分依赖了MAPKs信号转导通路。以上研究结果证明：DHA具有一定的免疫调节活性，可为DHA的应用提供理论依据。
