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丙酮酸利用途径阻断结合实验室进化构建高产缬氨酸的谷氨酸棒杆菌

放大字体  缩小字体 发布日期:2018-05-10
核心提示:近日的一篇研究中,来自斯图加特大学的研究人员利用一种名为代谢工程引导进化(Metabolic engineering to Guide Evolution,MGE)的策略进行谷氨酸棒杆菌缬氨酸高产菌株的构建。该文章《Metabolic engineering to guide evolution – creating a novel mode for L-valine production with Corynebacterium glutamicum》发表在Metabolic Engineering杂志
   近日的一篇研究中,来自斯图加特大学的研究人员利用一种名为代谢工程引导进化(metabolic engineering to Guide Evolution,MGE)的策略进行谷氨酸棒杆菌缬氨酸高产菌株的构建。该文章《metabolic engineering to guide evolution – creating a novel mode for L-valine production with Corynebacterium glutamicum》发表在metabolic Engineering杂志上。
 
  MGE的核心思想是通过代谢工程改造影响(损害)细胞的代谢,从而造成进化压力。MGE具体有三个阶段:(1)通过对宿主菌代谢工程改造造成进化压力,表现为菌体生长受阻;(2)以菌株的生长直接作为菌株进化的筛选指标,通过菌株培养传代获得生长能力提升的突变体;(3)通过比较全基因组测序(comparative whole genome sequencing ,WGS)确定获得的进化菌株中的突变位点,再进行验证和重构。
 
  作为概念验证,研究人员设计了基于MGE策略的谷氨酸棒杆菌高产缬氨酸菌株构建方案。为了高产缬氨酸,需提高前体丙酮酸供应,但对两个丙酮酸重要消耗途径PEP羧化酶和丙酮酸羧化酶敲除后,会使得菌株在葡萄糖培养基中生长受阻。研究人员将PEP和丙酮酸羧化酶缺失的谷氨酸棒杆菌在葡萄糖培养基中进行进化,获得能够达到野生型菌株80%生长速率的突变株。通过对3株获得的突变株进行WGS发现异柠檬酸脱氢酶(isocitrate dehydrogenase,ICD)均发生突变。菌株重构发现突变均降低了ICD活力,并且激活了乙醛酸支路从而补充了生长所需的草酰乙酸。且胞内柠檬酸、异柠檬酸、顺乌头酸和缬氨酸量相比野生菌株均明显提高。为了进一步实现缬氨酸的高产,研究人员又过表达了丙酮酸到缬氨酸合成途径,最终获得的谷氨酸棒杆菌Δppc Δpyc ICDG407S (pJC4ilvBNCE) 菌株的缬氨酸发酵滴度可达 8.9 ± 0.4 g/L。
 
 
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