来自江苏大学药学院的闻崇炜、赵烨清和石莉等人研究了3 种pH值条件下4种聚乙二醇（PEG）对卵白蛋白（OVA）、卵转铁蛋白（OVT）与溶菌酶（LYZ）的沉淀效率，并根据变化规律建立了无需后续脱盐的OVA分离新工艺。
1.PEG法沉淀OVA
取多份澄清的pH 7.5、6.5、5.5蛋清液，100 r/min低速搅拌中分别缓慢滴加PEG 4000贮存液至预设质量分数，离心收集各样品的上清液与沉淀，进行SDS-PAGE并计算OVA的沉淀率。结果表明：无论何种pH值的蛋清液，PEG 4000均可有效沉淀其中的OVA；OVA沉淀率随PEG 4000质量分数的递增而逐步上升，当其质量分数为9%～24%时，OVA沉淀率最低为1.8%，最高达94.8%；同时，以相同质量分数的PEG 4000处理3 种蛋清液，结果表明pH 5.5样品中OVA沉淀率最高，pH 6.5样品中次之，pH 7.5样品中最低。继续用PEG 6000、8000、10000分别处理上述3 种蛋清液，结果也表明，无论何种pH值的蛋清液，这3 种PEG均可以有效沉淀其中的OVA；OVA沉淀率均随PEG质量分数的递增而逐步上升；同时相同质量分数的PEG，总体在pH 5.5蛋清液中OVA沉淀率最高，pH 7.5蛋清液中最低，这一结果可能与OVA的等电点为4.5有关。
PEG 10000 OVA的沉淀率总体高于相同质量分数的PEG 8000、6000、4000。分析OVA沉淀率的变化趋势还可看出，PEG 4000质量分数为12%，蛋清液pH值为7.5时，OVA沉淀率较低，即上清液中可保留较多OVA；此时，蛋清液pH值调至5.5，沉淀率增幅（7.9%）也较低，上清液中因pH值变化损失的OVA也最少。
2.PEG法沉淀OVT
以PEG 4000、6000、8000、10000处理pH 7.5、6.5、5.5蛋清液，计算并分析OVT沉淀率。结果表明，4 种PEG均可以有效沉淀3 种蛋清液中的OVT，OVT沉淀率均随PEG质量分数的递增而快速上升，直至OVT被完全沉淀；当PEG质量分数相同时，pH值越低的蛋清液中OVT沉淀率越高；此外，当蛋清液pH值相同且所加PEG质量分数相同时，OVT沉淀率随PEG相对分子质量增加而升高，直至被完全沉淀。
同一相对分子质量PEG以相同质量分数处理相同pH值的蛋清液，OVT沉淀率均高于OVA，即相同条件下，OVT比OVA更易发生沉淀，尤其PEG 4000处理时差异高度显着。其中，质量分数12%的PEG 4000处理pH 7.5蛋清液时，OVA、OVT的沉淀率分别为1.8%、54.6%（P＜0.001），同样处理pH 5.5蛋清液，OVA、OVT的沉淀率分别为9.7%、98.1%（P＜0.001）。同一相对分子质量PEG以相同质量分数处理不同pH值的蛋清液，OVT沉淀率的变化幅度显着高于OVA，因此PEG法处理蛋清液后再调节其pH值，OVT比OVA更容易发生沉淀。其中，PEG 4000处理pH 7.5蛋清液至质量分数为12%后再调节pH值至5.5后，OVA、OVT的沉淀率增幅分别为7.9%（P＜0.001）、43.5%（P＜0.001）。
3.PEG法沉淀LYZ
以PEG 4000、6000、8000、10000分别处理pH 7.5、6.5、5.5蛋清液，计算并分析LYZ沉淀率。结果表明，PEG沉淀LYZ具有与OVT相似的规律，即4 种PEG均可以有效沉淀3 种蛋清液中的LYZ，LYZ沉淀率均随PEG质量分数的递增而快速上升，直至LYZ被完全沉淀；当PEG质量分数相同时，pH值越低的蛋清液中LYZ沉淀率越高；此外，当蛋清液pH值相同且所加PEG质量分数相同时，LYZ沉淀率随PEG相对分子质量增加而升高，直至被完全沉淀
同一相对分子质量PEG以相同质量分数处理相同pH值的蛋清液，LYZ沉淀率均高于OVA，即相同条件下，LYZ比OVA更易发生沉淀，尤其PEG 4000处理时差异高度显着。其中，PEG 4000处理pH 7.5蛋清液至质量分数为12%时，OVA、LYZ的沉淀率分别为1.8%、68.3%（P＜0.001），同样处理pH 5.5蛋清液，OVA、LYZ的沉淀率分别为9.7%、90.2%（P＜0.001）。同一种PEG以相同质量分数处理不同pH值的蛋清液，LYZ沉淀率变化幅度显着高于OVA，因此PEG法处理蛋清液后再调节其pH值，LYZ比OVA更容易发生沉淀。其中，PEG 4000处理pH 7.5蛋清液至质量分数为12%后再调节pH值至5.5后，OVA、LYZ的沉淀率增幅分别为7.9%（P＜0.001）、21.9%（P＜0.001）。
4.PEG法制备OVA
4 种PEG在3 种pH值的蛋清液中均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ。PEG质量分数越高，脱水及排斥作用越强，沉淀效率越高；高相对分子质量的PEG具有更长直链，缠绕作用更强，沉淀效率高于相同质量分数的低相对分子质量PEG；同时pH值可通过改变蛋白质分子表面电荷而影响其沉淀率。以蛋清蛋白质而言，OVT及LYZ比OVA更容易被PEG沉淀，鉴于以质量分数12%的PEG 4000处理pH 7.5蛋清液时，OVA、OVT及LYZ的沉淀率差异最大，当相应蛋清液pH值调至5.5时，OVA、OVT及LYZ沉淀率的变化幅度差异也最大。
结果表明，以质量分数12%的PEG 4000处理pH 7.5蛋清液，可以沉淀绝大多数OVT及LYZ，大部分OVA被保留在上清液中，所得上清液Ⅰ样品中OVA纯度为88.1%，提取率为95.1%；再将上清液Ⅰ的pH值调至5.5，可以进一步除去OVT及LYZ，同时只沉淀损失少量OVA，所得上清液Ⅱ样品中OVA纯度为99.7%，提取率为87.3%。
结 论
PEG 4000、6000、8000及10000均可有效沉淀OVA、OVT及LYZ，沉淀率受PEG质量分数及pH值影响。其中pH 7.5、PEG 4000质量分数12%时，OVA、OVT及LYZ的沉淀率相差最大，当pH值从7.5调至5.5时，3 种蛋白质沉淀率的变化幅度相差也最大。由此建立如下分离工艺：首先向pH 7.5的蛋清液中加PEG 4000至质量分数为12%，离心收集上清液，即得纯度88.1%的OVA，提取率为95.1%；再将所得上清液pH值调至5.5，离心收集上清液，所得OVA纯度提高至99.7%，提取率为87.3%。该工艺简便易行，有利于OVA的大规模制备及在食品及医药领域的应用。
